Efecto in vitro del D-002 sobre la actividad enzimática de la 5-lipoxigenasa (5-LOX)

Introducción: el D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular purificada de la cera de abejas, ha mostrado efectos antiinflamatorios, sin gastrotoxicidad secundaria, enmodelos experimentales. El tratamiento oral con D-002 reduce las concentraciones de leucotrieno B4 (LTB4) en exudados pleurales de ratas con pleuresía por carragenina, sugiriendo que podría inhibir la actividad enzimática de la 5-lipooxigenasa (5-LOX), si bien los mecanismos de la acción antiinflamatoria del D-002 no habían sido aún explorados. Objetivo: evaluar el efecto in vitro del D-002 sobre la actividad de la 5-LOX, utilizando la fracción citosólica de homogenatos de hígado de ratas. Métodos: las condiciones de ensayo utilizadas fueron las siguientes: fracción citosólica (50 µg de proteína) disuelta en solución reguladora borato 0,2 mol/L (pH 9) y ácido linoleico (7,8-250 mmol/L) como sustrato, ensayándose muestras paralelas incubadas con Tween-20/H2O (2 %) (vehículo, muestras controles), D-002 (0,9-1 000 µg/mL) o Lyprinol (500 µg/mL) (sustancia de referencia). La actividad enzimática se evaluó mediante el cambio de absorbancia a 234 nm producido por la formación de dienos conjugados y medido en espectrofotómetro UV-visible. Resultados: la adición in vitro del D-002 produjo una inhibición significativa, dependiente de la dosis (r= 0,980; p< 0,001) (IC50= 95,34 µg/mL) e incompetitiva de la actividad de la 5-LOX, cuya inhibición máxima (70 %) se alcanzó con 500 µg/mL. Conclusiones: con este estudio se demuestra que el D-002 es capaz de inhibir la actividad enzimática de la 5-LOX, efecto que podría explicar, al menos parcialmente, su acción antiinflamatoria en modelos experimentales in vivo.