An isotope dilution method for determining the absolute amounts and specific activities of proline and hydroxyproline in tissues

A method is described for estimating the absolute amounts and the specific activities of proline and hydroxyproline in tissue collagen, following the in vivo administration of H 3-labelled proline. The method depends on an isotope dilution procedure, C 14-labelled imino acids being added to tissue hydrolysates and recoveries, on chemical analysis, computed by reference to calibration curves prepared with a series of standard imino acid solutions. The chemical analysis is adapted from that of Peterofsky and Prockop and preliminary experiments for establishing the optimal conditions for each individual step in the separation, appropriate to this type of biological material, are described. Some cross-contamination between the “assay fractions” results in small over-estimates of the specific activities of both imino acids and of the absolute concentration of proline, but appropriate correction factors can be applied. Rat skin collagen contains 1·5 times as much proline as hydroxyproline; the specific activities obtained 48 hr after injection of H 3-labelled proline are approximately equal. On décrit une méthode pour le dosage des quantités absolues et des activités spécifiques de proline et d'hydroxyproline dans le collagène des tissus, suivant l'administration in vivo de la proline marquée de H 3. La méthode dépend d'un procéde de dilution isotopique, où des imino-acides marqués de C 14 s'ajoutent aux hydrolysates du tissu et les recouvrements suivant l'analyse chimique sont calculés selon des courbes de calibration préparées au moyen d'une série de solutions normalisées d'imino-acide. L'analyse chimique est une adaptation de celle de Peterkofsky et Prockop et on décrit des expériences préliminaires pour établir les conditions optimales pour chaque procédé individuel de la séparation, qui conviennent à cette espèce de matérial biologique. Un peu de contamination mutuelle entre les “fractions d'essai” donne de petites exagérations des activités spécifiques et des imino-acides et de la concentration absolue de proline, mais on peut appliquer des facteurs correctifs convenables. Le collagène de la peau de rat contient 1,5 fois autant de proline que d'hydroxyproline; les activités spécifiques obtenues 48 h. après l'injection de proline marquée d'H 3 sont à peu près ègales. Oпиcыbaetcя metoд для bыЧиcлehия aбcuлюthыx beлиЧиh и yдeльhoй aкtиbhoctи пpoлиha и oкcипpoлиha b кoллaгehe tкahи пocлe bbeдehия H 3- meЧehoгo пpoлиha b жиbyы tкahь. Metoд зabиcиt ot пpoцecca и