Purification and specificity of antibodies to adenosine

Antibodies to adenosine were elicited in rabbits by immunization with bovine serum albumin-adenosine conjugate. The antibodies were purified and fractionnated on two affinity columns (Sepharose-oligo(A) and Sepharose-AMP). Two families of antibodies have been obtained. The antibodies purified on the Sepharose-oligo(A) column react with poly(A) while those purified on the Sepharose-AMP column do not, as shown by gel diffusion. The association constants for the binding of Fab fragments or IgG purified on the Sepharose-oligo(A) column and several haptens were deduced from dialysis equilibrium, fluorescence quenching and displacement of AMP-fluorescein conjugate. The antibodies mainly recognize adenine, and the ribose or the phosphate group of (or AMP derivatives) do not play a critical role in the interaction. Thermodynamic parameters for adenosine-Fab fragments complexes have been determined ΔH o = 16 kcal/mole and ΔS o = — 15 cal. degree −1 mole −1. Circular dichroism studies indicate that about three nucleotide residues penetrate the binding site of Fab fragments. Des anticorps anti-adénosine ont été synthétisés par des lapins après injection du conjugué de la serumalbumine bovine et de l'adénosine. Les anticorps ont été purifiés et fractionnés à l'aide de deux colonnes d'affinité (Sepharose-oligo(A) et Sepharose-AMP). Deux familles d'anticorps ont été obtenues. Les expériences d'immunodiffusion montrent que les anticorps purifiés sur la colonne de Sepharose-oligo(A) réagissent avec le poly(A) tandis que ceux purifiés sur la colonne de Sepharose-AMP ne réagissent pas. Les constantes d'association des complexes entre les fragments Fab ou les IgG purifiés sur la colonne de Sepharose-oligo(A) et plusieurs haptènes ont été déduites d'expériences de dialyse à l'équilibre, d'extinction de fluorescence et de déplacement du conjugué AMP-fluoresceine. Ces anticorps reconnaissent essentiellement l'adénine, le ribose et le groupement phosphate de l'AMP (et des dérivés de l'AMP) ne jouant pas un rôle fondamental dans l'interaction. Les paramètres thermodynamiques des complexes fragments Fab-adénosine ont été déterminés, ΔH o = — 16 k cal/mole et ΔS o = — 15 cal d −1 mole −1. Des études de dichroisme circulaire indiquent qu'environ 3 résidus nucléotide peuvent entrer dans le site de fixation des fragments Fab.