Purification and characterization of ovine pancreatic α - amylase

Ovine pancreatic amylase has been purified from pancreas homogenate by ammonium sulfate, acetone precipitation, DEAE-cellulose chromatography and finally by specific adsorption on polydextran gel. The enzyme is homogeneous and found as a single form as shown by disc electrophoresis, SDS gel electrophoresis, electrofocusing and ultracentrifugation. Its specific activity is similar to that of porcine amylase. The amino acid composition indicates a high content in aromatic and acidic amino acids as for the porcine enzyme; however the methionine and half cystine content differ widely. The N-terminal end is blocked. Also ovine amylase is glycosylated. The molecular weight (56,000 – 58,000) is slightly higher than for the porcine enzyme. The isoelectric point is acidic (pI = 3.2). L'amylase pancréatique de mouton a été purifiée à partir d'homogénat de pancréas par précipitation au sulfate d'ammonium et à l'acétone, par chromatographie sur DEAE-cellulose et finalement par adsorption spécifique sur gel de polydextrane. L'enzyme est homogène et se présente sous une seule forme comme le montrent l'électrophorèse discontinue, l'électrophorèse en présence de SDS, l'électrofocalisation et l'ultracentrifugation. Son activité spécifique est semblable à celle de l'enzyme du porc. La composition en aminoacides indique un niveau élevé en amino-acides aromatiques et acides; cependant la teneur en méthionine et en demi-cystine est très différente. L'extrémité N-terminale est bloquée. D'autre part, l'enzyme est glycosylée. Le poids moléculaire (56.000–58.000) est légèrement supérieur à celui trouvé pour l'enzyme de porc. Le point isoélectrique est acide (pI = 3.2).