The mechanism of ferrocytochrome C oxidation by a horseradish isoperoxidase

The oxidation of ferrocytochrome c catalysed by highly purified horseradish isoperoxidase P 2 was studied kinetically. To take into account the low turnover number of the enzyme and the tendency to autocatalytic oxidation of ferrocytochrome c, experimental conditions were used which prevented us from using the steady-state treatment. According to kinetic results reported by several authors, a kinetic scheme involving a ternary complex between the enzyme and the substrates was postulated and simulated on a hybrid computer. By assuming that the interaction of peroxidase with hydrogen peroxide is much faster than the interaction with ferrocytochrome c, one can verify that this scheme explains the fact that initial velocity does not vary in relation to the hydrogen peroxide concentration and that a sudden change of slope occurs in the kinetic curve for an initial hydrogen peroxide/ferrocytochrome c ratio lower than 0.5. L'oxydation du ferrocytochrome c catalysée par l'isoperoxydase P 2 de raifort hautement purifiée a été étudiée cinétiquement. Afin de tenir compte du faible turnover de l'enzyme et de la tendance du ferrocytochrome c à s'autoxyder, nous avons été amené à utiliser des conditions expérimentales qui ne nous permettaient pas d'employer le traitement à l'état stationnaire. En accord avec les résultats cinétiques rapportés par plusieurs auteurs, un schéma cinétique mettant en jeu un complexe ternaire entre l'enzyme et les substrats a été postulé et simulé sur un calculateur hybride. Si l'on suppose que l'interaction de la peroxydase avec l'eau oxygénée est beaucoup plus rapide que l'interaction avec le ferrocytochrome c, il est possible de vérifier que ce schéma explique le fait que la vitesse initiale ne varie pas en fonction de la concentration en eau oxygénée et qu'une cassure brutale se produit sur la courbe cinétique enregistrée lorsque le rapport des concentrations initiales [eau oxygénée]/[ferrocytochrome c] est inférieur à 0.5.