Vectors for high conditional expression of cloned genes

Plusieurs plasmides présents à l'état de copies multiples, et portant les éléments de contrôle C 1857 (répresseur thermosensible) et O RP R (contrôle de la protéine Cro) du phage lambda, permettent d'exprimer à un très haut niveau les protéines placées sous le contrôle de P R après un passage à température non permissive. La calibration de la méthode a été effectuée en utilisant le gène de la β-galactosidase tronquée 17 acides aminés avant la fin de la protéine, ou un gène produit d'une fusion entre la β-galactosidase tronquée et une protéine étrangère. On montre que, du fait de l'instabilité de ces protéines vis-à-vis de la protéolyse, la transformation des plasmides correspondants dans une souche à faible niveau de protéase suffit à permettre une très forte surproduction (supérieure à 10–20 p. cent du total des protéines de la cellule) après passage à température élevée. La méthode est généralisable à l'expression d'autres gènes et les vecteurs construits peuvent être directement utilisés pour le clonage. Several multicopy plasmids carrying the control region of bacteriophage lambda lysogeny, including the gene of a thermosensitive repressor C 1857 have been constructed. The phages allow high expression of proteins under the transcription control of lambda promoter P R and translation control of Cro. The method has been assayed by measuring expression of either intact β-galactosidase, truncated β-galactosidase or β-galactosidase fused to a mitochondrial gene product. It is shown that use of a strain with low endogeneous proteolytic activities strongly improves the conditional yield of foreign proteins, so that a high overproduction can be achieved (10–20 per cent of the total protein content of the cell).