Concerning the thermal stability of E. coli 23S ribosomal RNA

La dénaturation thermique du RNA total extrait d' E. coli par plusieurs méthodes ne modifie pas de façon significative les propriétés de sédimentation de ses composants 23S, 16S et 4–5S, ce qui permet de conclure que ceux-ci contiennent des chaînes polynucléotidiques continues à stabilité thermique élevée. Cependant, les stabilités thermiques des rRNA 16S et 23S isolés du RNA total dans les mêmes conditions sont très différentes ; le rRNA 16S restant thermostable tandis que le rRNA 23S devient thermolabile. Le rRNA 23S thermolabile isolé récupère une stabilité thermique élevée après traitement par l'EDTA. L'étude de ce changement reversible de propriétés du rRNA 23S a permis d'écarter l'hypothèse d'une contamination nucléasique du type observé dans des études antérieures, et de montrer que la fragmentation du rRNA 23S observé à des températures élevées est provoquée par la catalyse de la scission thermique de liaisons phosphodiesters par des cations polyvalents. La stabilité thermique du rRNA 23S dans des préparations de RNA total d' E. coli est expliquée par la présence dans ces préparations d'un contaminant qui semble agir comme un chélateur de cations polyvalents. Les propriétés de ce contaminant montrent qu'il est très similaire, sinon identique au lipopolysaccharide pyrogène d' E. coli décrit par Westphal et coll. Total RNA prepared from E. coli by several extraction procedures behaves as a mixture of covalently continuous heat stable 23S, 16S and 4–5S components. 16S rRNA remains heat stable after isolation from such preparations, whereas isolated 23S rRNA is heat labile but becomes heat stable after EDTA treatment. This and other evidecence leads to the conclusion that heat lability of purified 23S rRNA is due, not to nuclease contamination of the type observed in earlier studies of the stability of this RNA, but to polyvalent cation catalyzed temperature-dependent scission of phosphodiester bonds. Heat stability of 23S rRNA in total RNA is due to the presence in these preparations of a contaminant which appears to act as a chelator of polyvalent cations. This material is similar or identical to the pyrogenic E. coli lipopolysaccharide described by Westphal and coll.