Solubilization, purification and characterization of d-alanine dehydrogenase from Pseudomonas aeruginosa and effects of solubilization on its properties

d-alanine dehydrogenase, an inducible, membrane associated enzyme of Pseudomonas aeruginosa was solubilized from envelope preparations by treatment with Triton X-100 and purified 31-fold in the presence of 0.05% Triton X-100 to 60% homogeneity. Gel electrophoresis indicated the presence of a single subunit of approximately 49 000 molecular weight. The enzyme contained FAD, and absorption spectra were typical of an iron-sulfur flavoprotein. Solubilization produced significant changes in some properties of the enzyme: solubilized enzyme showed increased affinity for d-alanine; a broader substrate specificity; and increased temperature sensitivity, compared with the membrane associated form. d-alanine déshydrogénase, une enzyme inductible associée avec les membranes de Pseudomonas aeruginosa, fut solubilisée à partir des préparations d'enveloppes avec du Triton X-100 et purifiée 31 fois en présence de 0,05% Triton X-100, jusqu'à une homogénéité de 60%. L'électrophorèse sur gel indiqua la présence d'une sous-unité simple avec un poids moléculaire d'environ 49 000. L'enzyme contient le FAD et les spectres d'absorption étaient caractéristiques d'une flavoprotéine au fer-soufre. La solubilisation produisit les changements significatifs dans certains caractères de l'enzyme. L'enzyme solubilisée démontra une affinité augmentée pour la d-alanine, une spécificité pour les substrats plus large et une augmentation de sa sensibilité aux changements de température, par comparaison à la forme de l'enzyme associée avec les membranes.