Large-scale isolation of polymorphonuclear leucocytes from bovine blood

Nous avons développé une méthode d'isolation d'une population enrichie (> 96 pour cent) de leucocytes polymorphonucléaires bovins (PMNs) à partir de 70 litres de sang, en utilisant un processus en deux étapes impliquant la séparation du sang, dans une fraction de globules rouges condensée contenant les PMNs et une fraction de plasma, par séparation par flot continue. On suit, ensuite, la lyse hypotonique des érythrocytes par centrifugation à 200 g sédimentant les PMNs. La production est de 93 ± 30 g; la récupération de 62 ± 20 pour cent et la viabilité > 95 pour cent. Etant donné que le sang de bovin peut être obtenu en quantités illimitées, la procédure décrite ici peut être appliquée afin d'obtenir de grandes quantités de PMNs bovins pour des études d'incubation et des purifications à grande échelle d'enzymes intracellulaires aux fins de caractérisation biochimique. A method for the isolation of an enriched population (> 96 %) of bovine polymorphonuclear leucocytes (PMNs) from 70 liters of blood was developed using a two-step procedure involving separation of the blood, in a packed red blood cell fraction containing the PMNs and a plasma fraction, by continuous flow blood separation. Hypotonic lysis of erythrocytes was then followed by centrifugation at 200 g sedimenting the PMNs. The yield was 93 ± 30 g, the recovery was 62 ± 20 %, viability was > 95 %. Since bovine blood can be obtained in unlimited amounts, the procedure described here can be applied to obtain large amounts of bovine PMNs for incubation studies and large-scale purification of intracellular enzymes suitable for biochemical characterization.