Characterization of immunoglobulin G binding to Staphylococcus aureus strain Wood 46

Protein A (PA)-activity was detected in Staphylococcus aureus strain Wood 46 which had been considered to be PA-negative. This staphylococcal strain bound 28% of 125I-labelled IgG, compared with 89% by strain Cowan I. The binding activities of both S. aureus strains were saturable, time-dependent and specific. The dissociation constants of 1.6 × 10 −9 M for Wood 46 and 9.3 × 10 −8 M for Cowan I indicated a similar affinity for human IgG in both strains. The number of IgG-binding sites were estimated to be 16,970 for Wood 46 and 41,200 for Cowan I. Exposure to heat and ultrasonication reduced PA-activities of strain Cowan I, but not that of strain Wood 46. Extraction of the staphylococci with guanidine and formic acid resulted in a reduction of IgG-binding activities only in strain Wood 46. Photooxidation, trypsinization and lysozyme treatment also diminished IgG-binding of strain Wood 46 to a larger extent than that of strain Cowan I. Extracellular PA from S. aureus strains Wood 46 and Cowan I could be purified by affinity chromatography on IgG-sepharose. The purified PA preparations gave single protein bands upon SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Their molecular weights were 42,000 and their isoelectric points approximated 5.0. Der vielfach als Protein A (PA)-negativ angesehene Staphylococcus aureus-Referenzstamm Wood 46 bildete zellgebundenes und extrazelluläres PA. Die Bindungskapazität für radioaktiv markiertes Human-IgG betrug bei S. aureus Wood 46 28 % im Vergleich zu 89 % bei Co wan I. Die Bindung von IgG war zeitabhängig und spezifisch. Eine nahezu gleich große Affinität der beiden S. aureus-St'imme für Human-IgG wurde durch die Dissoziationskonstänten von 1,6 × 10 −9 M bei S. aureus Wood 46 und 9,3 × 10 −8 M bei Cowan I angezeigt. Die Zahl der IgG-Bindungsstellen pro Bakterium konnte für Wood 46 mit 16970 und für Cowan I mit 41200 bestimmt werden. Durch Erhitzen und Ultraschallbehandlung der Staphylokokken nahm die PA-Aktivität bei Cowan I ab, dagegen nicht bei Wood 46. Guanidiniumchlorid- und Ameisensäureextraktion bewirkten nur in S. aureus Wood 46 eine signifikante Abnahme der Bindungskapazität für IgG. Photooxidation der Staphylokokken verringerte ebenso wie Behandlung mit Trypsin und Lysozym die IgG-Bindung bei Wood 46 in stärkerem Maße als bei Cowan I. Extrazelluläres PA von S. aureus Wood 46 und Cowan I konnte durch Affinitätschromatographie an IgG-Sepharose gereinigt werden. Die gereinigten PA-Präparationen waren in der SDS-Polyacryl