Function of individual E. coli 30 S ribosomal proteins as determined by in situ immunospecific neutralization : a tentative classification

Les protéines ribosomales d' E. coli étant toutes accessibles in situ dans la particule native, à leurs anticorps monovalents spécifiques, le rôle fonctionnel de chacune des protéines de la sous unité 30S a été étudié, en examinant les effets de leur neutralisation in situ par les fragments Fab spécifiques correspondants. Les réactions testées comprennent: o 1) la synthèse des protéines des phages T 4 et R 17; 2) la synthèse de polyphénylalanine; 3) l'attachement enzymatique du phe-tRNA en présence des 2 sous-unités 30S + 50S; 4) l'attachement du tRNA initiateur en présance des facteurs d'initiation IF 1, IF 2, IF 3; 5) le couplage de l'étape initiale de la traduction (interaction de la sous unité 30S et d'IF 3 avec le RNA messager naissant en l'absence de tRNA) avec la transcription de l'opéron lactose d' E. coli (λplacDNA). Malgré les difficultés d'interprétation redoutées du fait de leur antigénicité dispersée le long d'une structure souvent allongée, les protéines de la sous unité 30S peuvent être classées d'après les similitudes d'effets de leur neutralisation vis-à-vis des 5 réactions testées, en 5 catégories, évoquant un certain degré de topographie fonctionnelle. Le groupe I (S1, S7, S15, S20) est spécialement impliqué dans l'attachement du RNA messager à la sous-unité 30S. Le groupe II (S2, S3, S10) est impliqué dans une fonction commune d'attachement des tRNAs apparemment distincte de la reconnaissance de l'anticodon. Le groupe III (S14, S19, S21) et le groupe IV (S5, S6, S12, S13) influencent à des degrés divers la reconnaissance de la région initiatrice du RNA messager, celle du tRNA initiateur et l'attachement de ce dernier au site P. Le groupe V (S8, S9, S11, S18) semble contrôler particulièrement la région codon-anti-codon au niveau du site A. Les tests fonctionnels et les Fabs utilisés n'ont cependant pas fourni d'indications suffisantes pour classer les protéines S4 et S16. The accessibility of each 30S subunit protein to their cognate antibodies (IgG or Fabs) having been previously well established, the effects of their in situ specific neutralization by monovalent IgG fragments (FabI) are reported for five reactions: o 1) T 4 and R 17 RNA directed protein synthesis; 2) polyphenylalanine synthesis; 3) enzymatic Phe-tRNA binding in the presence of 30S + 50S subunits; 4) fMet-tRNA f binding to the 30S subunit in the presence of initiation factors IF 1, IF 2, IF 3; 5) coupling with λplac DNA transcription of the initial translation step (i.e