Inactivation of mycobacteriophage D29 using ferrous ammonium sulphate as a tool for the detection of viable Mycobacterium smegmatis and M. tuberculosis

There is still an urgent requirement for more sensitive, cost-effective methods for detection and susceptibility testing of mycobacteria in clinical samples. We have been investigating a simple bacteriophage-based system which could be used for both purposes. As this depends upon the detection of phages which have successfully infected cells, a key step is the efficient removal or inactivation of phages remaining free in the culture medium. We demonstrate here the use of ferrous ammonium sulphate as an effective agent for the inactivation of mycobacteriophage D29 without impairing phage replication in previously infected host bacteria. Using this property, we report the detection of viable Mycobacterium smegmatis, M. bovis BCG and M. tuberculosis using simple low-cost technology. The method is highly sensitive, since it is able to detect 10 colony-forming units of M. smegmatis. It is also rapid, with the detection of M. tuberculosis in sputum specimens within 48 h. Nous avons mis en oeuvre une méthode bactériophagique simple pour la détection des mycobactéries dans des prélèvements cliniques et pour l'évaluation de leur sensibilité aux antibiotiques. Cette méthode étant basée sur le dépistage des phages qui ont infecté les bactéries, l'étape déterminante consiste à éliminer efficacement ou à inactiver les phages restés libres dans le milieu de culture. Le sulfate ferreux d'ammonium se montre efficace pour l'inactivation du mycobactériophage D29 sans altération de la réplication intrabactérienne, ce qui nous a permis de déceler des cellules viables de Mycobacterium smegmatis, de M. bovis BCG et de M. tuberculosis d'une manière simple et peu coûteuse. Cette méthode est très sensible: elle peut détecter 10 unités formatrices de plages de M. smegmatis; et elle est rapide, pouvant déceler M. tuberculosis en 48 heures dans les expectorations.