Comparison of secretion of a hepatitis C virus glycoprotein in Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces lactis

A C-terminally truncated form of the hepatitis C virus (HCV) putative envelope glycoprotein E2 was expressed in two yeast species, Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces lactis, using a yeast signal peptide sequence to direct the viral glycoprotein to the endoplasmic reticulum (ER) pathway of secretion. Characterization of secreted E2 showed that the protein is endoglycosidase-H-sensitive in both yeasts. Moreover, in vivo inhibition of glycosylation with tunicamycin prevented secretion of E2 and showed that, of its 11 putative N-linked glycosylation sites, at least eight were core-glycosylated. Analysis of the heterologous glycoprotein by SDS-PAGE under nonreducing conditions and by gel filtration demonstrated the formation of multiple disulphides, which resulted in secretion of heterogeneous aggregates with an average molecular mass of 770-1000 kDa in both yeasts. However, variations were observed in the binding of the glycoprotein secreted by the two yeasts to a mannose-specific lectin, and also in its reactivity with anti-E2-specific antibodies. This denotes differences between the two yeasts in folding and/or modification of the E2 glycoprotein. Comparaison de la sécrétion d'une glycoprotéine du virus de l'hépatite C chez Saccharomyces cerevisiae et Kluyveromyces lactis . Une forme mutante de la glycoprotéine E2, composante potentielle de l'enveloppe du virus de l'hépatite C, a été exprimée et caractérisée dans les cellules de deux souches de levures, Saccharomyces cerevisiae et Kluyveromyces lactis. Cette forme mutante qui correspond à la glycoprotéine E2 ayant une délétion dans son domaine C-terminal a été exprimée chez les deux types de levures grâce à un peptide signal permettant la sécretion de la protéine à travers le réticulum endoplasmique. La caractérisation de la protéine montre que E2 sécrétée dans les deux types de levures est sensible à l'endoglycosidase H. De plus, l'inhibition in vivo de la glycosylation par la tunicamycine empêche la sécrétion de E2 et montre que, sur les 11 sites potentiels de N-glycosylation, au moins 8 sont glycosylés. L'analyse de la protéine E2 par SDS-PAGE en conditions non réductrices et par filtration sur gel montre que la glycoprotéine forme des agrégats d'environ 770–1000 kDa maintenus par des ponts disulfures. Cependant, les deux molécules ont une affinité différente pour une lectine spécifique du mannose et une réactivité différente avec des anticorps spécifiques anti-E2. Cela montre que la maturation et