EXPRESSION OF THE COAT PROTEIN GENES OF GRAPEVINE VIRUS A AND B IN NICOTIANA SPECIES AND EVALUATION OF THE RESISTANCE CONFERRED ON TRANSGENIC PLANTS

Agrobacterium-mediated transformation of leaf discs of N. benthamiana and N. occidentalis with constructs containing the coat protein (CP) genes of grapevine virus A (GVA) or grapevine virus A (GVB), produced several lines of transgenic plants. Some of the transformant lines (GVAcp+ and GVBcp+) growing on a selective kanamycin-containing medium were assayed in R₁ generation for the expression of transgenic mRNAs and coat proteins. Some of the plants that hybridized specific digoxigenin-labeled riboprobes to both viruses, contained detectable amounts of viral CP as shown by Western blot analysis, whereas others did not. The behaviour of R₁ seedlings following challenge inoculation with homologous viruses at a concentration of 1 μg ml⁻¹ was monitored by TAS-ELISA up to 18 days post inoculation. Various levels of resistance to both viruses were observed, as expressed by reduction of virus accumulation. Some of the GVAcp-i-lines also showed a 3-4 day delay in symptom appearance. Piante transgeniche di N. benthamiana e N. occidentalis sono state prodotte tramite la trasformazione genetica di dischi fogliari, mediata da Agrobacterium tumefaciens, con costrutti contenenti le protéine capsidiche, rispettivamente, di GVA e GVB. Alcune delle linee trasformate selezionate su kanamicina sono state saggiate, nella generazione R₁, per la espressione in vivo dell'RNA trascritto dal transgene e la produzione di proteina capsidica. I semenzali delle linee che ibridavano le specifiche ribosonde marcate con digoxigenina potevano esprimere oppure no quantità di proteina transgenica individuabile in Western blot. La risposta alla inoculazione di sfida, effettuata sui semenzali della generazione R₁ con virus omologo alla concentrazione di 1 μg ml⁻¹, è stata seguita con il saggio ELISA fino al 18° giorno successivo alla inoculazione. È stato osservato un grado variabile di resistenza alla infezione virale fra le linee poiché, nella maggior parte di esse, una sostanziale riduzione della accumulazione di virus corrispondeva ad una diversa percentuale di espressione dei sintomi.