MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE ADN AMBIENTAL EN ECOSISTEMAS DULCIACUÍCOLAS

Los seres vivos tienen la particularidad de liberar ADN en su ecosistema debido a procesos fisiológicos, éste es denominado ADN ambiental. Muchos estudios usan técnicas de "Barcoding" para la búsqueda indirecta de organismos usando ADN ambiental. Como objetivo se buscó poner a punto un método de extracción de ADN ambiental en ecosistemas dulciacuícolas. Las muestras fueron tomadas del parque japonés de la Universidad Nacional de San Luis y de dos puntos del río del Volcán en San Luis. Se evaluaron diferentes métodos de filtrado y cantidades de muestra a filtrar. Los kits de extracción ensayados fueron QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen) y High Pure PCR Template Preparation Kit (HP-PCR-TP Kit, Roche) para sangre periférica, NucleoSpin DNA Water (Macherey Nagel) y distintas cantidades de proteinasa K. La cantidad e integridad del ADN fue evaluada por espectrofotometría y mediante un gel de agarosa al 1%, teñido con Gel Red, respectivamente. Se obtuvo ADN solo con HP-PCR-TP Kit y el Kit NucleoSpin DNAWater. La mejor cantidad y calidad de ADN se obtuvo filtrando 1.000 ml de agua o hasta que el filtro se saturara en una bomba de filtrado al vacío con filtros "GN-6 Metricel®" de poros de 0,45 µm. Se utilizaron dos filtros en el HP-PCR-TP Kit, se le adicionaron 40 μl de buffer de lisis e incubó 40 min, luego se adicionaron 40 μl de proteinasa K y la muestra se calentó a 55° C por 30 min en un baño maría, después se siguieron las indicaciones del fabricante. Se obtuvieron mejores resultados con HPPCR-TP Kit, el cual no es específico para muestras de agua. Este método fue más económico y efectivo.