Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular

Amaç: Bu çalışmada, Manisa’da tedavi gören bir viseral leishmaniasis hastasından izole edilen ve Leishmania’lara özgü ITS-1, hsp70 ve cpb gen bölgelerine yönelik analizlerle Leishmania donovani/L. infantum hibridi olduğu gösterilen etkenin karakterizasyonuna yönelik in vivo deneyler sunulmakta olup, ilk sonuçlar L. donovani ve L. infantum’un referans suşlarıyla karşılaştırılmaktadır. Yöntemler: Çalışma için, 25-30 gr ağırlığında dişi Balb/C fareler ile (her biri 16’şar fare içeren) üç farklı çalışma grubu (ÇG) ve 8 fareden oluşan bir kontrol grubu oluşturulmuştur. Sıvı azottaki referans L. donovani (MHOM/IN/1980/DD8), L. infantum (MHOM/TN/1980/IP1) suşlarla L. donovani/L. infantum hibridi (MHOM/TR/2014/CBVL-LI/LD) çözdürülüp kültive edilmiş ve 25 °C’de inkübe edilmiştir. Üç suşa ait 1x108/mL promastigot, 15 (mikrolitre; μL) dozda ÇG’deki farelerin kuyruk venlerine uygulanmıştır. Fareler sakrifiye edildikten sonra çıkarılan karaciğer ve dalak dokuları immünolojik, immünohistokimyasal ve patolojik testler için saklanmıştır. Bulgular: Farelerin karaciğer ve dalak dokularında enfeksiyon varlığı, hem özgül ELISA testiyle hem de NNN besiyerinde karaciğer ve dalak dokularından Leishmania promastigotlarının üretilmesiyle gösterilmiştir. Bununla birlikte, karaciğer ve dalaklardan hazırlanan “touch biyopsi” yaymaları incelendiğinde, hiçbir grupta Leishmania amastigotlarına rastlanmamıştır. Ayrıca VL’ye bağlı doku hasarını saptamak için yapılan immünohistokimyasal boyamalarda (IL-9, CD-117, anti-MBP, CD163, CD4, CD8 ve CD31) hiçbir grupta doku hasarına yönelik bir bulgu elde edilmemiştir. Sonuç: Edinilen sonuçlar, hibrid Leishmania ve referans L. donovani ve L. infantum suşlarının ÇG’deki Balb/C farelerinin karaciğer ve dalaklarına ulaştığını, ancak patolojik bir etki oluşmadığını göstermektedir. Bununla birlikte, bu üç Leishmania izolatının, başka bir çalışma için aynı tür farelerin deri altlarına uygulandığında deride lezyon oluşturduğu belirlenmiştir. Projeye ait deneyler tamamlanıp sonuçların elde edilmesinin ardından bu çalışmada sunulan bulgular yeniden değerlendirilecektir.