REPARACIÓN DE RUPTURAS DE DOBLE CADENA SOBRE EL ADN EN DISTINTOS COMPARTIMENTOS SUB-NUCLEARES EN RESPUESTA A VENENOS DE TOP2

Los venenos de Topoisomerasa II (Top2), entre ellos el etopósido (ETO), inducen rupturas de doble cadena sobre el ADN, manteniendo unida a Top2 a los extremos 5´ generados (ccTop2). La remoción de ccTop2 es fundamental para llevar a cabo la reparación del daño, y la Tirosil-ADN-Fosfodiesterasa 1 (TDP1) es una enzima que puede hidrolizar la unión fosfodiester entre el ADN y el residuo tirosina del sitio catalítico de Top2. La cromatina está organizada en dominios, caracterizados por diferentes estados y que resultan en propiedades estructurales y funcionales distintas. La Top2 presenta actividad tanto en dominios eucromáticos (EU) como heterocromáticos (HC). Nuestro objetivo fue estudiar la participación de TDP1 en la reparación de lesiones inducidas por ETO en diferentes compartimentos nucleares. Los resultados demuestran que células silenciadas en TDP1 acumulan mayor cantidad de ccTop2 durante las fases S y G2 del ciclo celular inducidas por ETO. La acumulación de señales de daño (yH2AX) en ellas fue dependiente de la replicación e independiente de la transcripción. La ausencia de TDP1 resulta además en una cinética de reparación alterada. En células proficientes, la distribución sub-nuclear de TDP1 en respuesta a ETO mostró una asociación preferencial a dominios HC; en particular, a secuencias α-satélites de ADN. Los focos yH2AX persistentes inducidos por ETO y asociados a HC también fueron incrementados en células deficientes en TDP1. Nuestros resultados sugieren una actividad de reparación de TDP1 focalizada en compartimentos HC en respuesta al daño generado por ETO.