Новая изоформа адаптерного белка ITSN1 формирует гомодимеры посредством своего С-концевого домена

Ранее мы идентифицировали новую изоформу адаптерного эндоцитозного белка ITSN1, названную ITSN1-22a. Вестерн-блот анализ выявил наличие двух иммунореактивных полос 120 и 250 кДа, соответствующих ITSN1-22a. Цель этой работы состояла в изучении возможности формирования димеров изоформой ITSN1-22a. Методы. Иммунопреципитация и Вестерн-блот анализ использованы для исследования возможности димеризации изоформы. Идентификацию участка, отвечающего за димеризацию, осуществляли с помощью сайт-направленного мутагенеза и делеционного анализа. Ингибирование эндоцитоза индуцировали дефицитом ионов калия. Для митогенной стимуляции клеток применен эпидермальный фактор роста. Результаты. Нами обнаружено, что сверхэкспрессированная в клетках НЕК293 изоформа ITSN1-22a формирует димеры. Димеризация изоформы обусловлена ее специфическим С-концевым доменом. Нами показано, что цистеины С1016 и С1019 вовлечены в процесс гомодимеризации. Ингибирование клатрин-опосредованного эндоцитоза и митогенная стимуляция клеток не влияют на формирование димеров изоформой ITSN1-22a. Выводы. ITSN1-22a – это единственная на сегодня изоформа ITSN1, способная образовывать гомодимеры посредством дисульфидных связей, что может быть важно для формирования ITSN1-содержащих белковых комплексов.