脂多糖联合三磷酸腺苷对肺上皮细胞来源A549细胞IL-1β分泌的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）在脂多糖（LPS）联合三磷酸腺苷（ATP）诱导的人肺上皮细胞来源A549细胞中的表达变化及其机制。方法以肺上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,采用Western blotting法确认A549细胞中是否存在NLRP3炎症体各组件蛋白（NLRP3、ASC、caspase-1）的表达。检测不同浓度LPS（0、1、5、10、50、100μg/ml）对A549细胞NLRP3炎症体通路蛋白表达（Western blotting检测）及IL-1β分泌（ELISA法）的影响,选择最佳LPS浓度。采用LPS联合ATP（LPS＋ATP）刺激A549细胞,并检测其对NLRP3炎症体通路蛋白表达和IL-1β分泌的影响。采用siRNA干扰A549细胞NLRP3基因,观察LPS＋ATP诱导的A549细胞中IL-1β的分泌情况。结果 Western blotting检测结果显示,A549细胞中存在NLRP3炎症体组件蛋白NLRP3、ASC、caspase-1的表达。与对照组比较,LPS单独处理细胞后,NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1p45蛋白表达增加（P〈0.05）,且呈剂量依赖关系,但未检测到活化形式caspase-1p20蛋白的表达及细胞因子IL-1β的分泌。与LPS单独刺激组相比,LPS＋ATP刺激组可检测到活化形式的caspase-1p20蛋白表达及细胞因子IL-1β分泌（P〈0.05）。采用siRNA干扰NLRP3基因表达可显著抑制LPS＋ATP诱导的IL-1β表达（P〈0.05）。结论 A549细胞中存在NLRP3炎症体通路,LPS＋ATP诱导A549细胞分泌的细胞因子IL-1β在下调NLRP3基因后显著减少,初步提示IL-1β的释放受NLRP3炎症体途径调控。