Artificial Cysteine S‐Glycosylation Induced by Per‐O‐Acetylated Unnatural Monosaccharides during Metabolic Glycan Labeling

The unexpected, non‐enzymatic S‐glycosylation of cysteine residues in various proteins by per‐O‐acetylated monosaccharides is described. This artificial S‐glycosylation greatly compromises the specificity and validity of metabolic glycan labeling in living cells by per‐O‐acetylated azido and alkynyl sugars, which has been overlooked in the field for decades. It is demonstrated that the use of unacetylated unnatural sugars can avoid the artifact formation and a corrected list of O‐GlcNAcylated proteins and O‐GlcNAc sites in HeLa cells has been assembled by using N‐azidoacetylgalactosamine (GalNAz). Per‐O‐acetylierte Monosaccharide induzieren die nichtenzymatische Cystein‐S‐Glykosylierung von verschiedenen Proteinen. Dieser künstliche Prozess hat großen Einfluss auf die metabolische Glykanmarkierung in lebenden Zellen, kann aber durch die Verwendung nichtacetylierter nichtnatürlicher Zucker umgangen werden. Mithilfe von GalNAz wurde eine korrigierte Liste O‐GlcNAcylierter Proteine und O‐GlcNAc‐Stellen in HeLa‐Zellen erstellt.