High-level expression of cyclodextrin glycosyltransferase in E. coli using a T7 promoter expression system

Das Cyclodextrin-Glykosyltransferase(CGTase)-Gen (cgt) aus B. macerans wurde durch Polymerkettenreaktion verstaerkt, in den pCRII TA-Clonungsvektor und den pET-21(+)-Transkriptionvektor geklont und in E. coli eingefuehrt. CGTase wurde als Inklusionskoerperprotein in dem pET-21(+)-cgt/BL21(DE3)pLysS-System produziert. Wenn die Klone in LB-Medium kultiviert wurden, wurde eine ueber 14fache Erhoehung (19,4 mg/L) an loeslicher CGTase in dem Cytoplasma mit dem pET gefunden. Eine 39fache Erhoehung (54,9 mg/L) an CGTase-Produktion wurde erhalten, wenn die Inklusionskoerper zu aktiver CGTase renaturiert wurden. Eine 115fache Erhoehung (160,4 mg/L) der gesamten CGTase-Produktion wurde erhalten, wenn das pET-System in einem TP-Medium kultiviert war. Die Produktion von Inklusionskoerpern vereinfachte die CGTase-Reinigung, weil die Inklusionskoerper durch Zentrifugation isoliert werden konnten und die renaturierte Proteinfraktion eine hoehere CGTase-Konzentration besass.