H2O2 가 수정체 상피 세포 이동과 FAK 의 활성화에 미치는 영향

목적 : 산화스트레스인 H2O2는 직접적으로 세포에 RNA나 DNA에 손상을 주기도 하며 신호 전달 물질로도 작용하여 세포내부의 변화를 유발하여 여러 질병을 야기 시키기도 한다. H2O2에 의한 세포사나 신호전달에 대해서는 많은 연구들이 있으나 세포의 이동에 대한 연구는 미진하며 비정상적인 세포 이동은 질병을 유발하기도 하고 안과 질환에서는 후발성 백내장을 가져오기도 한다. 따라서 H2O2가 human 수정체 상피세포에 신호전달로 작용하여 세포 이동에 어떤 영향을 주는지 알아보았다. 대상과 방법 : Human 수정체 상피세포(HLE B3)에 H2O2를 처리하여 migration assay와 actin cytoskeleton의 Immuno-fluorescence stain을 하였다. 그리고 cell adhesion과 migration을 조절하는데 중요한 역할을 하는 focal adhesion kinase의 activation을 보기 위하여 세포에 H2O2를 처리하고 immunoprecipitation과 western blot analysis를 하였다. 또한 세포외 기질을 분해하는 MMP-2의 H2O2를 처리하였을 때 mRNA에 변화가 있는지 조사하였다. 결과 : H2O2가 HLE B3 세포의 이동성을 증가시켰음을 확인하였고 H2O2에 의해 FAK이 activation 됨을 알 수 있었다. 결론 : 이 연구에 의하면 H2O2에 의해 세포 이동이 있었으며 MMP-2의 mRNA 발현 양상에는 차이가 없었으나 FAK의 acti-vation 변화는 수정체 상피 세포 이동에 중요한 역할을 하리라고 생각된다. Purpose : Hydrogen peroxide has been implicated as a causative factor of various cellular dysfunction, cell death, transformation. In addition, oxidative stress has been suggested as a crucial inducer of cataractformation not only the nuclear-type cataract but also anterior polar type cataract. Transformation of lens epithelial cells accompanying accumulation of extracellular matrix molecules, and cell migration is observed in the cataract forming area of lens. In the present study, we investigated in the migration of lens epithelial cells and the activation of focal adhesion kinase(FAK), because there have been many reports showing that activation of FAK increased cell migration. Method : After treatment hygrogen peroxide in a dose-dependent on HLE B-3 cell line, we have performed immuno fluorenscence staing of actin stress fiber and migration assay, and then isolated total RNA to identify expression of MMP-2 from the cell line. To examine FAK activity, we are performed Phosphotyrosine Immunoblot analysis. Result : We observed the increased cell migration in response to hydrogen peroxide in a dose dependent manner. In addition, we observed that the phosphorylation of focal adhesion kinase was increased with the treatment of hydrogen peroxide. Also, we examined the expression of the matrix etalloproteinases-2(MMP-2) which disintegrates extracellular matrix and participates in cell migration. The result showed that the mRNA level of MMP-2 did not increase by hydrogen peroxide. Conclusions : The results suggest that hydrogen peroxide enhanced migration of lens epithelial cell, and that FAK may play a role in the process of cell migration. In conclusion,