아그로박테리움을 이용한 Protein Disulfide Isomerase (PDI) 유전자의 수박 형질전환

피마자로부터 분리한 PDI 유전자를 포함하는 pMBP-1 벡터를 아그로박테리움 LBA4404를 통하여 수박으로의 형질전환을 시도하였다. 수박의 자엽에 박테리아를 접종하고 72시간 cocultivation을 한 후 2mg․L-1 BA, 0.05mg․L-1 ABA, 300mg․L-1 carbenicillin 과 500mg․L-1 kanamycin이 첨가된 MS배지에 치상하여 광조건 하에서 배양하였다. 치상 4주 후에 자엽절편으로부터 유식물체가 형성되었다. 생존하는 유식물체는 매 2주마다 kanamycin을 포함하지 않는 성장배지에서 계대배양을 하였다. 형질전환식물체의 게놈에 PDI유전자가 전이되었음을 확인하기 위하여 PCR, Southern 분석 및 Northern 분석을 수행하였다. 이러한 과정을 통하면 향후 상업적인 가치가 있는 수박계통에 용이하게 형질전환을 시킬 수 있을 것으로 판단된다. An attempt was made to transform a PDI gene from Ricinus communis to a watermelon (Citrullus lanatus Thumb), using Agrobacterium tumefaciens LBA4404, harboring binary vector pMBP-1. Cotyledonary explants were inoculated with a bacterial suspension (108 cells/mL), cocultivated for 72 hours and placed on MS medium with 2 mg·L-1 BAP, 0.05 mg·L-1 ABA, 300 mg·L-1 carbenicillin and 500 mg·L-1 kanamycin, and then cultured under the light. Adventitious shoots formed on the explants after four weeks of culture. Surviving explants were transferred every 14 days to the shoot elongation medium (kanamycin free medium). The presence of the PDI gene in the genome of stable transgenic plant was confirmed by PCR amplification, Northern and Southern blot analysis. A reliable protocol was developed for the routine production of transgenic plants using commercially important inbred lines.Additional key words: Citrullus lanatus, cotyledonary explant, regeneration, transgenic plants KCI Citation Count: 2