‘남도’와 ‘제주재래’ 마늘로부터 원형질체 나출, 융합 및 콜로니 형성

‘남도’와 ‘제주재래’ 마늘 주아에서 유래된 캘러스를 이용하여 원형질체를 나출했고 PEG용액으로 융합했다. ‘제주재래’ 마늘 주아에서 유래된 캘러스는 1% Macerozyme R-10와 2% Cellulase Onozuka R-10의 효소 조합에서 높은 수율을 나타내었고(1.8×104 protoplasts/mL), 남도 마늘 또한 1% Macerozyme R-10와 2% Cellulase Onozuka R-10의 효소 조합에서 1.1×104 protoplasts/ml로 높게 나타났다. 나출 시간은 ‘남도’마늘의 경우 5시간, ‘제주재래’마늘의 경우 4시간이 적당하였다. 원형질체 융합은 PEG법을 사용하였고, PEG 6000을 실온에서 5분간 방치하고 그 사이에 원형질체를 떨어뜨리고, 다시 5분 후에 섞어서 2시간 동안 암 조건에서 배양하였다. 2시간이 지난 후에 기본 MS배지에 0.1-1.0mg･L-1 BA, 0.1-1.0mg･L-1 NAA를 첨가하고 25℃에서 16시간 광, 8시간 암 조건으로 배양하였다. 2주간 배양한 후, 콜로니를 얻었고 캘러스 형성을 통한 재분화를 유도하기 위해 순원기배양 중에 있다. Protoplasts were isolated from callus derived from the bulbils of garlic cultivars ‘Namdo’ and ‘Jejujaerae’, and were fused by polyethylene glycol (PEG) solution. When treated with the enzyme solution of 1% Macerozyme R-10 and 2% Cellulase Onozuka R-10, callus induced from ‘Jejujaerae’ yielded the highest number of protoplasts (1.8×104 protoplasts/mL). The number of protoplasts from ‘Namdo’ was the highest (1.1×104 protoplasts/mL) when the callus was treated with an enzyme solution of 1-2% Macerozyme R-10, 1-2% Hemicellulase and 1-2% Cellulase Onozuka-RS adjusted to pH 5.3. The optimal durations required for enzyme treatment to produce the stable protoplasts were 5 hours for ‘Namdo’ and 4 hours for ‘jejujaerae’. The frequency of protoplast fusion was the highest when treated with PEG solution having a molecular weight of 6,000 daltons at room temperature for 5 minutes and then cultivated for two hours in the dark. The fused protoplasts were cultured at 25℃ with 16 hours photoperiod in MS medium containing 0.1-1.0 mg･L-1 6-benzylaminopurine (BA), 0.1-1.0 mg･L-1 α-naphthalene acetic acid (NAA) or their combinations. Colony was induced from fused protoplasts in 2 weeks and then cultivated in 1/2 MS containing 1.0 mg･L-1 BA and 1.0 mg･L-1 NAA. Colony formation is an important step leading to the regeneration of the plants. KCI Citation Count: 1