ヒト神経組織からのGTP cyclohydrolase I type 1 cDNAの単離

Tetrahydrobiopterin(BH4)は, 芳香族アミノ酸を水酸化するmonooxygenaseやnitric oxide synthaseの補酵素として働き, 我々はその薬理作用に注目している. BH4は, GTPから生合成され, その律速酵素がGTP cyclohydrolase I(GCHI)である. ヒトではcDNAが単離され, type1, 2, 3といった3種類の多型が報告されているが, poly(A)tailつきのcDNAは報告されていない. また, ヒトの非神経組織においては約3.6KbのGCHImRNAが発現していることが報告されている. そこで, 今回我々はヒトのpoly(A)tailがついた完全長のcDNAを単離し, 全塩基配列を決定し, ヒト神経組織における発現を検討した. 〔方法〕マウス脳から単離したcDNAをプローベとして, ヒト副腎褐色細胞腫のライブラリーをスクリーニングして, 塩基配列の決定を試みた. また, ヒトGCHI type1のcDNA断片を使用してヒト褐色細胞腫におけるmRNAの発現をNorthern解析した. 〔結果〕15個の陽性クローンが得られ, 全てがtype1であった. 0.4%アガロース電気泳動にて約3kbのcDNAを選択して, poly(A)tailを含んだ2921bpのcDNAを単離した. 翻訳領域は750bpとtype1と同一であった. 3非翻訳領域はpoly(A)tailまで2002bp, 5非翻訳領域は148bpであった. そして, その3非翻訳領域の1713番目から2015番目にtype2に特異的な3側翻訳領域の一部と3非翻訳領域がみられた. ヒト副腎原発の褐色細胞腫組織のNorthern解析では, 約4.0Kbの大きさの単一のバンドが確認された.