網膜に特異的なcDNA（pCR307）のクローニングとその解析

神経細胞の機能を明らかにするために我々は, 一つのアプローチとして遺伝子工学操作を用いている. これまでに我々は, ウシ網膜mRNAから二本鎖cDNAライブラリーを作製し, プラス・マイナス法でロドプシンを始めとする網膜に特異的なcDNAを数種クローニングした. 今回, 網膜に特異的と考えられるクローンpCR307について若干の知見を得た. 1）プラス・マイナス法（ウシ網膜, および脳から作製した一本鎖cDNAをプローブとした）で得たクローンpCR307をプローブとし, Okayama－Berg法で作製したcDNAライブラリーとcolony hybridizationを行ったところ, 約0.4%のコロニーとハイブリダイズした. 約540塩基対（bp）のクローンR17を得た. 得られたR17に対応するmRNAが網膜に特異的か否かを調べるために, Hinf I断片（300bp）をプローブとしNorthern hybridizationを行った. R17は, ウシ網膜mRNAとのみハイブリダイズしたが, ウシ脳, 肝臓, ラットC6グリオーマ, マウス神経芽細胞腫からのmRNAとはしなかった. 対応するmRNAは, 約8.2S（500bp）であった. R17は, ほぼ全長cDNAクローンと考えられたのでその塩基配列を決定した. 74アミノ酸（222bp）よりたるopen reading frameが取れた. その分子量は, 8515ダルトン, pIは, 約4.9であった. 他方, コンピューター解析から既知たん白質とのホモロジーは見い出せたかった. 以上の事より, R17は, 網膜に特異的な未知cDNAと考えられる. コードされているたん白質の生理的役割等を検討中である.