배양된 망막색소상피 세포에서 조건에 따른 형태변화와 Cytokeratin subclones , Vimentin , GFAP 의 검색

망막색소상피세포(RPE) 배양시 시간적,공간적,이형분화와 성장인자첨가 유무에따라 그 형태학적 변화와 세표특이 단백향원의 발현을 보기 위하여 다음과 같이 실험하였다. 세표는 배태 4-6개월의 태아와 체중 80-90kg의 돼지의 RPE를 취하였으며 배지에는 세포외 간질(ECM)과 세 종류의성장 인자( Insulin, bFGF, EGF) 를 각각,혹은 배합하여 첨삭하였다. 형태학적 관찰은 도상 위상차현미경으로 하였으며 면역염색은 Cytokeratines, vimentin, GFAP에 대한 단클론 항체를 사용하였고 특히 Cytokeratines는Moll씨 분류의 1,5,7,8,10,14,17,18및 19를 사용하여 RPE 특히 항체를 알아보고자 하였다. 세포의 형태변화와 증식은 배지부착 후 색소과립이 소실되면소 시작되었으며 상피형에서 섬유아세포 모양의 중배엽성 이형분화는 세표밀도가 적은 곳에서 저명하였고, 뒤에 군집을 이루면서 원형으로 환원하였다. 증식과 군집을 이루는 기간은 ECM과 성장인자 첨가군에서 유의하게 빨랐다. Cytokeratines은 태아에서는 19,18,17,8,7 아군이, 돼지에서는 19,CAM 5.26 (818) 아군이 양성으로 발현되었고 Vimentin은 형태와 시기,군집여부에 관계 없이 전예에서 강한 양성발현을 보였다. 본 실험을 통하여 RPE의 이형분화현상을 이해하기 위해서는 세포골격 단백합성에 관한 보다 많은 연구가 필요하다고 생각된다(한안지 37:1460~1477,1966). To describe and evaluate the morpholgic changes and the different expression of cell-specific of correlating protein molecules during cell growth, immunocytochemistry and morphologic observations were done on retinal pigment epithelial (RPE) cells obtained from several culture conditions. These include culture time, spatial or cell density, transdifferentiation, and presence of growth factors. The human fetal and porcine RPE cells were cultured with and without individual growth factor or in combinations including extracellular Matrix (ECM ), Insulin, basic fibroblatic growth factor ( bFGF ) and epidermal growth factor ( EGF ). Mouse Monoclonal anti-human, or anti-mouse antibodies with or without species-cross reactivity against the intermediate filament proteins( cytokeratin, vimentin, GFAP ) were used. To determine RPE-specific molecules of cytokeratin, nine commercially available antibodies, representing subclones of moll`s catalog number 1,5,7,8,10,14,17,18,19 were applied. The morphological changes and the proliferation of cells started after their attachment on the culture plate as soon as they lost pigment granules. The epithelial cells like fibroblasts occurred in the area where the cellular density was low, and finally, their shape was restored to their original phenotype when the cellular confluency was achieved. The degree of proliferation and the duration of achieving confluency of cells were dependent on whether ECM and growth factors were added in media or not. cell with the epithelial morphology were positively stained whth anti-cytokeratine antibodies , especially whth clone 19,18,17,8 and 7 in human RPE cells ; whth 19, CAM 5.26 (818) in porcine cells. The fusiform or digitating cells of sparse density also expressed