GC/MS에 의한 담석과 담즙내의 Cholesterol, Bile Acids 및 Sterols의 동시 Profiling

Cholesterol supersaturation in bile, which causes gallstone formation, is the result of low bile acid secretion or high cholesterol secretion. The quantitative analysis of cholesterol, bile acids and sterols which are precursors of cholesterol have been used to examine the changes in bile component. We described a simple, sensitive and reproducible method for simultaneous determination of cholesterol, five bile acids and seven sterols in human bile juices and gallstones by capillary column gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). Clinical samples were hydrolyzed by alcoholic KOH, extracted twice (pH 14 and 1) and derivatized to trimethylsilyl (TMS) ether with $MSTFA/NH_4I$ (N-methyl-N-trimethylsilyltrifluoroacetamide/ammonium iodide) mixture in order to be detected on the GC/MS. The good quality control data were obtained through within-a-day and day-to-day test (RSD values were 1.72-13.79, 0.68-14.10, respectively) and the recovery range of them was 73.56-96. 95 Using this method, biliary and gallstone compositions in the patients with intrahepatic stones were analyzed. The amounts and its relative distribution of cholesterol, bile acids and sterols showed different pattern in bile juices and gallstones. 담즙산 분비 저하 및 콜레스테롤의 과도한 분비는 담석 형성의 주된 원인으로 담즙내의 담즙산과 콜레스테롤 및 그 전구 물질인 스테롤의 상대적인 농도는 담즙 성분의 이상을 알아보기 위한 중요한 지표로 알려져 있다. 이에 본 연구에서는 염기를 이용한 가수 분해와 pH 14와 1에서 두 번의 액체-액체 추출을 거친 후, $MSTFA/NH_4I$ 혼합액으로 유도체화 시키는 전처리 방법과 GC/MS를 이용한 새로운 분석 방법을 설정, 담즙산과 스테롤 그리고 콜레스테롤의 동시 분석을 시도하였다. 그 결고 회수율은 73.56-96.95% 이었고 within-a-day 및 day-to-day 분석의 RSD 값은 각각 1.72-13.79%, 0.68-14.10% 이었으며, 이 방법을 간내 담석증 환자에 적용하여 담즙과 담석내에 존재하는 7종의 스테롤과 5종의 담즙산, 그리고 콜레스테롤의 농도 및 그들간의 상대적인 농도 분포를 측정한 결과 담즙고 담석에서 현저히 다른 차이를 보였다.