사람 신장의 근위세뇨관상피세포에서 Monocyte Chemoattractant Protein-1의 발현에 대한 Endothelin-1의 효과

배 경 : Endothelin-1은 신장 혈관과 사구체간질세포를 수축시키는 혈역학적 작용 뿐 아니라 사구체간질세포 증식의 촉진, 세포외 기질의 축적 등과 같은 면역학적 기전으로도 신 손상에 관여한다. 그러나 endothelin-1이 화학주성물질의 분비 조절 또는 면역세포의 침윤에 관여하는 지는 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 endothelin-1이 근위세뇨관상피세포에서 염증세포의 침윤에 중요한 역할을 하는 화학주성물질 중 하나인 monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1)의 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 방 법 : 사람의 신장 근위세뇨관상피세포를 배양하여 endothelin-1 (10^(8)-10^(6) M)을 처리하고 8, 16, 24, 48 및 72시간 후에 배양액 내 MCP-1 농도를 ELISA 방법으로 측정하였다. Endothelin-1 자극후 MCP-1 mRNAdm 발현정도는 Northern blot 방법으로 평가하였으며 MCP-1 유전자 발현에 관여하는 전사인자로서 NF-κB와 AP-1의 활성도는 electrophoretic mobility shift assay (EMSA) 방법으로 측정하였다. 결 과 : 근위세뇨관상피세포 배양액 내 MCP-1 농도는 자극 전에 비해 endothelin-1 (10^(-7) M)으로 자극 후 48시간에 유의하게 증가되었으며 여러 농도의 endothelin-1 (10^(-8)-10^(-6) M)으로 자극하였을 경우 MCP-1 단백질 생성은 농도 의존적으로 증가하였다. MCP-1 mRNA 발현도 endothelin-1에 의해 증가되었다. Endothelin-1 NF-κB와 AP-1 활성도를 증가시켰으며 NF-κB 복합체는 p65와 p50이, AP-1 복합체에는 c-Fos와 c-Jun이 증가된 활성도의 주요 아형임을 알 수 있었다. 결 론 : Endothelin-1은 신장 근위세뇨관상피세포에서 MCP-1 단백질과 유전자 발현을 증가시켰으며 NF-κB와 AP-1 활성도를 증가시켰다. 이러한 결과는 endothelin-1이 근위세뇨관상피세포에서 MCP-1 발현의 증가를 통한 염증성 변화 유발로 신 손상에 관여할 것임을 시사하며, MCP-1 발현의 증가의 기전으로 endothelin-1에 의한 NF-κB 및 AP-1 활성도 증가의 가능성을 시사한다. Background : Monocyte chemoattractant protein 1 (MCP-1) is produced by renal cells and an important mediator for monocyte/macrophage infiltration in various inflammatory renal diseases. In the process of renal disease, endothelin-1 is known to play an active role in cell growth, inflammation and fibrosis. The aim of this study was to investigate whether endothelin-1 regulates MCP-1 expression in cultured human proximal tubular epithelial cells. Methods : Primary cultured human proximal tubular epithelial cells (PTEC) were incubated with or without various dose of endothelin-1. MCP-1 concentration in PTEC conditioned medium was measured by sandwich ELISA. MCP-1 mRNA expression was analyzed by Northern blotting. The NF-κB or AP-1 activity in response to endothelin-1 was measured by electrophoretic mobility shift assay. Results : Endothelin-1 (10?? M) stimulated MCP-1 production in PTEC, which was significant at 48 hours and various doses of endothelin-1 (10?? 10? M) increased MCP-1 production from PTEC in a dose-dependent manner. Northern blot analysis revealed that endothelin-1 stimulated MCP-1 mRNA expression. Endothelin-1 (10?? M) stimulated both AP-1 binding activity and NF-κB subunit bound to the DNA probe and that c-Fos and C-Jun are major AP-1 subunit bound to the DNA probe. Conclusion : Our results suggest that endothelin-1