Aspergillus sojae Tarafından Üretilen Poligalakturonazın Kısmi Saflaştırılması için Kromatografik Bir Yaklaşım

Bu çalışmanın amacı, A. sojae mutantından poligalakturonaz üretilmesi ve ham ekstraktın kromatografik yöntemlerle kısmi saflaştırılmasıdır. Peptitlerin konfirmasyonu için ilk basamak olarak, jel içinde sindirilmiş sodyum-dodesil-sülfat- poliakrilamid-jel-elektroforezi (SDS-PAGE) jellerinde matriks-yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaştırmalı-uçuş zamanlı- kütle spektrometresi (Maldi-TOF MS) analizi yapılmıştır. Poligalakturonaz üretimi için, katı-faz ve derin fermentasyonlarda üç farklı karbon kaynağı kullanılmıştır. Ham ekstrakt ilk olarak iyon değişim kromatografisi (IEXC) ile saflaştırılmıştır ve ardından bunu boyut eleme kromatografisi izlemiştir. Derin [acı portakal kabuğu, şeker pancarı melası ve (NH4)2SO4] ve katı-faz (buğday kepeği, şeker pancarı ve HCl) fermentasyonlarından elde edilen ham ekstraktlar yüksek seviyede poligalakturonaz enzim aktivitesi (sırasıyla 95.22 and 50.27 U/mL) göstermiştir. IEXC toplanmış fraksiyonunun (180, 200 ve 220 mM tuz fraksiyonları) boyut elemesi, en yüksek verimi (%36) ve saflaştırma katını (2.00) göstermiştir. SDS-PAGE’den elde edilen olası poligalakturonaz bantları jel içinde sindirilmiş ve peptit konfirmasyonu için Maldi-TOF-MS ile analiz edilmiştir.