應用最小葡聚醣結合功能區塊作為重組蛋白質純化用之親和性標籤

腸膜明串珠菌之葡聚醣蔗糖酶具有將蔗糖中之葡萄糖轉化成葡聚醣之能力。該酵素C端之葡聚醣結合功能區塊（dextran-binding domain，DBD）能與葡聚醣形成可逆性鍵結，具有開發成為親和性標籤之潛力。本研究主要針對腸膜明串珠菌葡聚醣蔗糖酶結構中能與葡聚醣形成可逆性鍵結之最小功能區塊進行探討，以期利用此區塊作為新型親和性標籤。研究中，利用聚合酶連鎖反應進行DBD DNA之選殖與刪減突變，並將不同DNA片段運用於綠螢光蛋白質（green fluorescent protein，GFP）-DBD融合蛋白質表現載體或GFP-删減突變DBD融合蛋白質表現載體之建構。利用電轉形法將表現載體送入大腸桿菌BL21（DE3）中，探討DBD之刪減突變對重組融合蛋白質之表現與純化之影響。結果顯示，DBD-D1為能與葡聚醣形成有效可逆性鍵結之最小功能區塊，且不影響重組融合蛋白質之表現與可溶性。利用DBD-D1作為GFP之親和性標籤可獲得之純化效率高於His tag與DBD。研究結果說明，DBD-D1具有作為新一代親和性標籤之潛力。