Mechanistic aspects concerning the anti-tumor activity of the a1-adrenergic antagonist Prazosin on a human medullary thyroid carcinoma cell line

In diesem Projekt wurde getestet, durch welche Mechanismen der Quinazolin basierende α1-Adrenorezeptor-Antagonist Prazosin seinen pro-apoptotischen Effekt auf Zellen der Medullären Schilddrüsenkarzinom Zelllinie MTC-SK entfaltet. Die Grundlage für diese Untersuchungen bildete die Tatsache, dass schon in früheren Studien demonstriert werden konnte, dass Quinazoline einen pro-apoptotischen Effekt auf maligne Zellen verschiedenster Gewebearten aufweisen. Neben der Untersuchung ob Prazosin entweder Apoptose über den intrinsischen oder extrinsischen Aktivierungsweg induziert, wurde die Beeinflussung des Zellzyklus durch Prazosin genauer analysiert. Preliminare Proteomik-Experimente gezeigten dass das Protein BAP31 möglicherweise eine Rolle im pro-apoptotischen Effekt von Prazosin spielt. Der anti-proliferative Effekt von Prazosin auf MTC-SK Zellen wurde bestätigt und die Aktivierung von sowohl Caspase 8 und 9 gezeigt. Zellzyklusanalysen zeigten eine Akkumulation von polyploiden Zellen (8n) und eine parallele dosisabhängige Aktivierung von p53. Bereits nach 24 h wurde ein erhöhter Prozentsatz von Zellen in der späten S und G2/M Phase in Prazosin behandelten Kulturen detektiert. Es wurde zwar das totale Proteinlevel von BAP31 in der Zelle durch die Prazosin-Behandlung nicht verändert, aber die Expression von BAP31 auf der Zellmembran nahm durch Prazosin-Behandlung dosisabhängig zu. MTC-SK zeigen eine zeit- und dosisabhängige Reduktion ihrer Viabilität in Reaktion auf Prazosin assoziiert mit der Aktivierung von Caspase 8, Caspase 9 und p53. Die Aktivierung dieser pro-apoptotischen Mediatoren ist vermutlich eng assoziiert mit einem G2/M Arrest und der Ausprägung von Polyploidie. Diese Daten bestätigen die Ergebnisse früherer Studien die eine Inhibition der Cytokinese durch Prazosin indizierten. Weiters konnte in der Arbeit bestätigt werden, dass BAP31 eine Rolle in der zytotoxischen Reaktion von Prazosin auf die Zellen spielt. The objective of this thesis was to characterize the anti-tumor-effects of the quinazoline-based α1-adrenoceptor antagonist Prazosin in the cell line MTC-SK. The MTC-SK cell line was established from a lymph note metastasis of a patient suffering from Medullary Thyroid Carcinoma (MTC). The project is based on preliminary results which demonstrated a pronounced pro-apoptotic effect of Prazosin on MTC-SK cells and also on other malignant cells derived from different tissue types. One aim of the thesis was to analyse alterations in the cell cycl