StIIR124C: un nuevo mutante para la caracterización del mecanismo de formación de poros de Sticholisina II en células

La Sticholisina II (StII) es una actinoporina producida por la anémona de mar Stichodactyla helianthus (Anthozoa: Stichodactylidae). Su estructura tridimensional se caracteriza por un núcleo central de hojas-[beta] intercaladas flanqueado por dos hélices-[alpha], un sitio de unión interfacial y lazos que interconectan las fibras [beta]. El mecanismo de formación de poros de las actinoporinas transcurre mediante varias etapas dentro la que se encuentra: la unión a la membrana, la oligomerización, el despliegue del extremo amino y Analmente la formación del poro. Dicho mecanismo no ha sido completamente dilucidado, fundamentalmente las bases moleculares de la etapa de oligomerización. En general, las actinoporinas no poseen residuos de cisteínas en su estructura primaria. La obtención de mutantes de cisteína permite el marcaje con numerosas sondas fluorescentes o de espín específicas a los grupos sulfldrilos (SH) para el estudio de la interacción proteína-membrana. Esto impone la necesidad de obtener variantes mutadas de la proteína que incorporen la cisteina a su estructura. En este trabajo, se obtuvo el mutante StII R124C en el que se sustituyó el aminoácido [Arg.sup.124], localizado hacia el extremo carboxilo de StII, por un residuo de cisteína. StII R124C se expresó en el sistema de Escherichia coli y se purificó en un solo paso mediante cromatografía de intercambio catiónico. La actividad biológica de StII R124C evaluada mediante la lisis de células eritrocitarias no mostró variación, lo que sugiere que la sustitución de [Arg.sup.124] por cisteína en StII recombinante no afecta la capacidad formadora de poros de la proteína. Así, el mutante StII R124C constituye una alternativa para la realización de estudios de relación estructura-función.