Morulustatin, una desintegrina que inhibe la agregacion plaquetaria inducida por ADP, aislada de la serpiente de cascabel de la roca de Tamaulipas, Mexico

La serpiente de la Roca de Tamaulipas (México) (Crotalus lepidus morulus) es una serpiente de cascabel de montaña que se encuentra en el bosque de pino-encino húmedo y el bosque nuboso superior de la Sierra Madre Oriental en el suroeste de Tamaulipas, en el centro de Nuevo León, y el sureste de Coahuila en México. El veneno de estas serpientes fue fraccionada por cromatografía liquida para descubrir desintegrinas. Las desintegrinas son moléculas de baja masa molecular, no enzimáticas que interfieren con la interacción de célula-célula y célula-matriz atraves de los receptores de células. Se recogieron once fracciones por cromatografía de intercambio aniónico y fueron agrupadas en seis grupos (I, II, III, IV, V y VI). Las proteínas de los seis grupos fueron analizadas por SDS-PAGE y Western blot utilizando anticuerpos dirigidos contra desintegrinas. Los anticuerpos reconocieron cinco bandas diferentes (II, III, IV, V y VI) de los seis grupos, en una gama de masas moleculares de 7 a 105 kDa. El análisis de transferencia Western blot mostró un menor número de bandas de proteína en un rango de alta masa molecular y dos bandas en el rango de masa de desintegrina en el grupo II en comparación con los otros cuatro grupos. Éste se separó adicionalmente en nueve fracciones usando cromatografía de fase reversa C18. La fracción 4 mostró la capacidad de inhibir la agregación plaquetaria y fue nombrada morulustatin, que exhibió una banda única con una masa de aproximadamente 7 kDa. El análisis de espectrometría de masas de la fracción 4 reveló la identificación de péptidos de desintegrina LRPGAQCADGLCCDQCR (MH + 2035,84) y AGEECDCGSPANCCDAATCK (MH + 2328,82). La morulustatin inhibe la agregación plaquetaria inducida por ADP en la sangre humana completa y este efecto es dependiente de la concentración con una C[I.sub.50] de 89,5 nM [+ ó -] 12. Palabras clave: Crotalus lepidus morulus; desintegrinas; hemostasis; morulustatin; plaquetas; veneno The Tamaulipan rock rattlesnake (Crotalus lepidus morulus) is a montane snake that occurs in the humid pine-oak forest and the upper cloud forest of the Sierra Madre Oriental in southwestern Tamaulipas, central Nuevo Leon, and southeastern Coahuila in Mexico. Venom from this rattlesnake was fractionated by High-Performance Liquid Chromatography for the purpose of discovering disintegrin molecules. Disintegrins are nonenzymatic, small molecular weight peptides that interfere with cell-cell and cell-matrix interactions by binding to