Standardization of the titration of the epsilon toxin of Clostridium perfringens type D in cell line as an alternative to animal bioassay/Padronizacao da titulacao da toxina epsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem continua de celulas como alternativa ao bioensaio animal

Enterotoxemia (also called pulpy kidney disease) is an enteric disease, that affect ruminants, produced by epsilon toxin from Clostridium perfringens type D, an anaerobic commonly isolated from soil and feces of healthy animals. The diagnostic is based on detection of this exotoxin in the intestinal content by soroneutralization in mice. Therefore, this study aimed to standardize a test for detection and titration of the toxin in vitro, and compare it with the phenomenon in vivo. A volume of epsilon toxin was titrated in mice and in some cell lines. After concluding the most sensitive cell line, were held in vitro titrations of dilutions from a toxin wich one had in vivo titer known. The results were grouped and a mathematical equation was developed. MDCK cell line showed that the phenomenon observed in vitro can be expressed by a mathematical equation wich shows a correlation of 98.33% with a minimum lethal dose determined in vivo. Therefore, the soroneutralization using MDCK allows a specific, sensitive, practical, fast, and doesn't requere use of animal titration of epsilon toxin. Key words: enterotoxemias, bioethics, soroneutralization, MDCK. Enterotoxemia, tambem chamada de doenca do rim pulposo, doenca que acomete os ruminantes domesticos, e causada pela acao da toxina epsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaerobio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O metodo tradicional de diagnostico baseia-se na deteccao e classificacao dessa exotoxina no conteudo intestinal por meio da soroneutralizacao em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para deteccao e titulacao dessa toxina in vitro e compara-lo ao fenomeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina epsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em varias linhagens continuas de celulas. Apos a determinacao da linhagem celular mais sensivel, realizaram-se ensaios de titulacao in vitro de diluicoes de uma partida de toxina, comparando-os com os titulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equacao matematica que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, alem de mais sensivel, demonstrou que o fenomeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equacao matematica que apresenta uma correlacao de 98,33%, com a dose minima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina epsilon de C. perfringens tipo D de forma especifica e