Evaluation of methods for maintenance and preservation of sporulating bacteria producer of CGTase enzyme/ Avaliacao de metodos para manutencao e preservacao de bacteria esporulada produtora da enzima CGTase

The conservation of cells without morphologic, physiologic or genetic changes is a biotechnology necessity. Bacillus firmus strain 37 is a sporulating bacteria that produces the cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) enzyme, which transforms starch into cyclodextrins (CDs). This study aimed to evaluate the maintenance and preservation of B. firmus strain 37 stored in a solid medium, sterile soil and in glycerol at low temperature (-70°C). In order to evaluate the best bacteria maintenance method, cell immobilization procedures were used on inorganic matrices. The immobilized cells were submitted to the initial biomass effect test and scanning electron microscopy (SEM). Periodic transfer was not an appropriate method, because the strain reduced the production of CGTase. The storage in sterile soil proved effective and the enzyme production remained constant. The conservation in low temperatures was also satisfactory, with cell counts practically the same after 360 days. The immobilization evaluated by SEM did not show any difference in the adsorption of the cells preserved by the different methods. The same happened for the initial biomass effect test, which presented higher beta-CD production when 1.5 g of cells was used. Key word: biological preservation, cyclodextrins, immobilized cells. A conservacao de celulas sem mudancas morfologicas, fisiologicas ou geneticas e uma necessidade da biotecnologia. Bacillus firmus cepa 37 e uma bacteria esporulada produtora da enzima ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase), que transforma o amido em ciclodextrinas (CDs). O objetivo deste estudo foi avaliar a manutencao e preservacao de B. firmus cepa 37 estocada em meio de cultivo solido, solo esteril e em glicerol a baixa temperatura (-70°C). Para avaliacao do melhor metodo de manutencao da bacteria foram utilizados procedimentos de imobilizacao das celulas em matrizes inorganicas. As celulas imobilizadas foram submetidas ao teste do efeito da biomassa inicial e a microscopia eletronica de varredura (MEV). O repique nao foi um metodo adequado, pois a cepa diminuiu a producao de CGTase. A estocagem em solo esteril mostrou-se eficaz e a producao da enzima mantida constante. A conservacao a baixas temperaturas tambem foi satisfatoria, com contagem de celulas praticamente a mesma apos 360 dias. A imobilizacao, avaliada por MEV, nao mostrou diferenca na adsorcao das celulas conservadas pelos diferentes metodos. O mesmo ocorreu para o teste do efeito da biomassa inicia