Detection and identification with molecular techniques of species of the genus Armillaria from soil samples

En este trabajo se presentan los resultados de identificación de especies de Armillaria realizada directamente a partir de muestras de suelo, sin la necesidad de aislar y cultivar previamente el micelio en placa. El ADN se extrajo a partir de 250 mg de suelo y la región ITS del hongo se amplificó por nested PCR con los cebadores externos ITS1 e ITS4 y los internos AR1 y AR2. Los productos resultantes de la doble amplificación se analizaron por RFLP utilizando para la digestión las enzimas de restricción Hinf I y MboI. Este método permite discriminar entre especies de Armillaria mediante diferentes patrones de bandas característicos de cada especie. El 70% de las muestras analizadas se identificaron como A. mellea, el 16% como A. gallica y el 14% de las muestras no presentaron infección por Armillaria. In the present work Armillaria species were identified taking soil samples without isolating and cultivating the mycelium on a plate. DNA was extracted from 250 mg of soil an the ITS region of the rDNA was amplified using Nested-PCR with external primers ITS1 and ITS2 and internal primers AR1 and AR2. Products obtained were analysed by RFLP using the restriction enzymes Hinf I and Mbol I, thus obtaining fragments of different molecular weight. This method allows the discrimination among Armillaria species using band patterns specific for each species. The 70% of the analyzed samples corresponds to A. mellea; the 16% corresponds to A. gallica, and the 14% of the samples does not present Armillaria infection.