METHODS FOR DETERMINING SEQUENCE INFORMATION IN POLYNUCLEOTIDES USING MASS SPECTROMETRY

The invention relates to method for determining sequence information in polynucleotides by combining the recent disparate technologies of mass spectrometry and polynucleotide hybridization, amplification, extension and/or ligation techniques. Broadly, in a first step, the method for determining sequence information in a sample polynucleotide includes hybridizing with a sample nucleotide one or a mixture of oligonucleotide probes having a nucleotide sequence complementary to a portion of the sample polynucleotide, thereby forming a complex. Then, in a second step, the complex is contacted with at least a member selected from the group consisting of nucleosides, dideoxynucleosides, polymerases, nucleases, transcriptases, ligases and restriction enzymes to alter at least a subset of said oligonucleotide probes. In a third step, the method provides for determining the molecular weight of at least the subset of altered probes by mass spectrometry and infering the sequence information of the sample polynucleotide therefrom. Procédés de détermination d'informations de séquence dans des polynucléotides qui consistent à combiner les récentes technologies disparates de la spectrométrie de masse et les techniques d'hybridation, d'amplification, d'allongement et/ou de ligation des polynucléotides. Dans une première étape, le procédé de détermination des informations de séquence dans un polynucléotide échantillon comprend l'hybridation avec un nucléotide échantillon d'une sonde oligonucléotidique ou d'un mélange de ces sondes comprenant une séquence nucléotidique complémentaire à une partie du polynucléotide échantillon pour former ainsi un complexe. Dans une deuxième étape, le complexe est mis en contact avec au moins un élément sélectionné dans le groupe formé par les nucléosides, les didésoxynucléosides, les polymérases, les nucléases, les transcriptases, les ligases et les enzymes de restriction pour modifier au moins un sous-ensemble desdites sondes oligonucléotidiques. Dans une troisième étape, le procédé assure la détermination de la masse molaire d'au moins un sous-ensemble de sondes modifiées au moyen de la spectrométrie de masse et déduit des résultats obtenus par cette technique les informations de séquence du polynucléotide échantillon.