PROCESS FOR PURIFYING COLLAGENASE

A process for purifying crude collagenase is disclosed. The collagenase purification process includes providing a stabilized crude collagenase solution containing collagenase, pigment, toxins, bacterial materials, and proteolytic enzyme impurities including clostripain, trypsin, and caseinase. The stabilized collagenase solution is applied to hydroxylapatite packing. Pigment and caseinase are eluted with a first solution comprising about 0.05 M to about 0.3 M phosphate buffer, and then collagenase, trypsine, and clostripain are eluted with a second solution comprising about 0.35 M to about 0.5 M phosphate buffer to provide a first collected solution. The first collected solution is then applied to gel filtration packing and collagenase and clostripain are eluted with a neutral pH buffer solution, to provide a second collected solution. The second collected solution is then applied to Reactive Red 120-Agarose packing and collagenase is eluted with a neutral pH buffer solution to provide purified collagenase. The process provides extremely pure collagenase in high yield with reduced consumption of eluting solutions and avoids unpredictable gradient eluting techniques. Procédé de purification de collagénase brute. Le procédé consiste à utiliser une solution de collagénase brute stabilisée contenant de la collagénase, un pigment, des toxines, des matières bactériennes ainsi que des impuretés enzymatiques proléolitiques, parmis lesquelles la clostripaïne, la trypsine et la caséinase. La solution de collagénase stabilisée est appliquée à un matériau de remplissage composé d'hydroxylapatite. Le pigment et la caséinase sont élués avec une première solution comprenant environ 0,05 M à environ 0,3 M d'un tampon de phosphate, puis la collagénase, la trypsine et la clostripaïne sont éluées avec une seconde solution comprenant environ 0,35 M à environ 0,5 M d'un tampon de phosphate afin de produire une première solution qui est recueillie. La première solution recueillie est ensuite appliquée à une matière de remplissage pour filtration sur gel, et la collagénase et la clostripaïne sont éluées avec une solution tampon de pH neutre, afin de produire une seconde solution qui est également recueillie. La seconde solution recueillie est alors appliquée à une matière de remplissage composée de Rouge Réactif 120-Agarose, et la collagénase est éluée avec une solution tampon de pH neutre pour produire la collagénase purifiée. Ce procédé permet d'obtenir un rendement élevé de c