PRODUCTION OF INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR-1 IN METHYLOTROPHIC YEAST CELLS
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1), a naturally occurring, relatively short, single chain polypeptide, is prepared by growing methylotrophic yeast transformants containing in their genome at least one copy of DNA encoding IGF-1, in operational linkage with DNA encoding a signal sequence, which is...
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Format: | Patent |
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Zusammenfassung: | Insulin-like growth factor-1 (IGF-1), a naturally occurring, relatively short, single chain polypeptide, is prepared by growing methylotrophic yeast transformants containing in their genome at least one copy of DNA encoding IGF-1, in operational linkage with DNA encoding a signal sequence, which is effective for directing secretion of proteins from the host cells and which also includes the proteolytic processing syte lys-arg and may include one or more glu-ala sequences. In preferred embodiments the signal sequence is the S. cerevisiae alpha mating factor pre-pro sequence. Expression of both the DNA encoding IGF-1 and the pre-pro signal sequence are regulated by a promoter region derived from a methanol responsive gene of a methylotrophic yeast. DNA constructs and recombinant methylotrophic yeast strains used for the expression and secretion of IGF-1 are also provided. For preferred embodiments, protease deficient Pichia pastoris strains are provided.
On prépare le facteur-1 de croissance similaire à l'insuline (IGF1-), un polypeptide naturel, à chaîne unique et relativement court, en provoquant la croissance de transformateurs de levure méthylotrophique contenant dans leur génome au moins une copie de l'ADN codant IGF-1, en liaison opérationnelle avec l'ADN codant une séquence de signaux, qui est efficace pour diriger la sécrétion de protéines à partir des cellules hôtes et qui comprend également le site de traitement protéolytique lys-arg et peut comprendre une ou plusieurs séquences glu-ala. Dans les aspects préférés, la séquence de signaux est représentée par la séquence pre-pro du facteur d'accouplement alpha de S. cerevisiae. L'expression de l'ADN codant IGF-1 et de la séquence de signaux pre-pro est régulée par une région promotrice provenant d'un gène sensible au méthanol d'une levure méthylotrophique. L'invention décrit également les structures d'ADN et les souches de levure méthylotrophique recombinantes utilisées pour l'expression et les sécrétions de IGF-1. Des aspects préférés mettent en application des souches de Pichia pastoris déficientes en protéases. |
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