METHOD FOR OBTAINING AND PURIFYING THE CARBOXYL-TERMINAL FRAGMENT OF THE DNA POLYMERASE I OF STREPTOCOCCUS PNEUNOMIAE

Disclosed is a method for subcloning a fragment of the gene po1A of S.pneumoniae into an expression vector E.coli. With the disclosed method, it has been possible to obtain the recombinant plasmid pSM10. Said plasmid codes for a polypeptide of 70.6 kDa which has the polymerase activity free of exonuclease activity of the enzyme DNA polymerase-exonuclease of S.pneumoniae. The polypeptide has been hyperexpressed and purified from E.coli. The yield of active enzyme obtained corresponds approximately to 7 % of the cellular proteinic content. 0.73 mg of pure protein has been obtained from 500 ml of culture, with a specific enzyme activity of 13537 units of DNA polimerase per mg of protein. L'invention concerne un procédé pour le subclonage d'un fragment du gène po1A du S.pneumoniae en un vecteur d'expression de E.coli. A l'aide de ce procédé, on a pu obtenir le plasmide recombinant pSM10. Ce plasmide code pour un polypeptide de 70,6 kDa qui possède l'activité polymérase exempte d'activité exonucléase de l'enzyme ADN polymérase-exonucléase de S.pneumoniae. Le polypeptide a été hyperexprimé et purifié à partir de E.coli. Le rendement de l'enzyme active obtenu correspond approximativement à 7 % du contenu protéique cellulaire. On a obtenu 0,73 mg de protéine pure à partir de 500 ml de culture, avec une activité enzymatique spécifique de 13537 unités d'ADN polymérase par mg de protéine.