REDUCTION OF PEROXIDATIC AND CATALATIC INTERFERENCE WITH ASSAYS OF PEROXIDATIC ACTIVITY

Described are mild reagents and gentle methods for inactivating background peroxidatic activity in a test sample before analysis by a peroxidase-linked specific binding assay. Reagents are provided which inactivate plant peroxidases, hemoglobin, methemoglobin, metmyoglobin, leucocyte peroxidases, hematin, and iron salts, individually or in combination. Also described are improved methods for detecting the presence of blood or the occurrence of hemolysis in a test sample, which use specific inactivating reagents or unique assay reaction kinetics to distinguish hemoglobin and methemoglobin from other peroxidatic catalysts potentially present in a test sample. The invention provides simple methods for blocking catalase interference with either the background-reduction reactions described above or the assay of peroxidatic activity, and for stopping signal generation in solid-phase assays of the peroxidatic activity of hemoglobin, methemoglobin, or plant peroxidases. The invention includes a method for using the specific and permanent inactivation of plant peroxidases to permit serial probing of a test sample for different analytes in a peroxidase-linked specific binding assay. Sont décrits des réactifs et des procédés doux pour inactiver l'activité peroxydique de fond dans un échantillon d'essai avant analyse par un dosage de fixation spécifique à liaison peroxydase. On utilise des réactifs qui inactivent les peroxydases végétales, l'hémoglobine, la méthémoglobine, la métmyoglobine, les peroxydases leucocytaires, l'hématine, et les sels ferriques individuellement ou en combinaison. Sont également décrits des procédés perfectionnés pour détecter la présence de sang ou l'apparition d'hémolyse dans un échantillon, qui mettent en oeuvre des réactifs inactivant spécifiques ou des cinétiques réactionnelles de dosage originales pour distinguer l'hémoglobine et la méthémoglobine d'autres catalyseurs peroxydiques potentiellement présents dans un échantillon. L'invention décrit des procédés simples pour bloquer l'interférence de la catalase dans les réactions de réduction de fond précitées ou bien le dosage d'activité peroxydique, et pour stopper la production de signaux dans des dosages en phase solide de l'activité peroxydique de l'hémoglobine, de la méthémoglobine, ou des peroxydases végétales. L'invention concerne également un procédé utilisant l'inactivation spécifique et permanente des peroxydases végétales pour permettre l'exploration sérielle d'un échantillon af