ITERATIVE MULTIPLEX GENOME ENGINEERING IN MICROBIAL CELLS USING A RECOMBINANT SELF-EXCISABLE SELECTION MARKER SYSTEM

The disclosure relates to the field of molecular biology, to compositions and methods for the usage of recombinant self-excisable selection marker systems in microbial cells. Specifically, this disclosure pertains to compositions and methods for reestablishing a predetermined target sequence within a microbial genome, by integrating and excising two recombinant self-excisable selection marker constructs in consecutive transformation steps. Methods and compositions are also disclosed in which recombinant self-excisable selection marker systems are used in multiplex genome engineering, by combining marker integration with simultaneously modifying at least one additional target sequence at a different genome sequence. La divulgation concerne le domaine de la biologie moléculaire, des compositions et des procédés pour l'utilisation de systèmes de marqueurs de sélection auto-exécutable recombiné dans des cellules microbiennes. Plus particulièrement, la présente invention concerne des compositions et des procédés permettant de rétablir une séquence cible prédéterminée dans un génome microbien, en intégrant et en excisant deux constructions recombinées de marqueurs de sélection auto-exécutables au cours d'étapes de transformation consécutives. La présente invention concerne également des procédés et des compositions utilisant des systèmes de marqueurs de sélection auto-exécutables recombinés dans le cadre de l'ingénierie génomique multiplex, en combinant l'intégration des marqueurs et la modification simultanée d'au moins une séquence cible supplémentaire dans une séquence génomique différente.