GENETIC ENHANCEMENT OF EXOSOME PRODUCTION

Levels of expression of antibiotic resistance genes are increased up to six-fold by inserting a proteasome-targeting tag into transgenes expressed in eukaryotic cells. Various selectable marker proteins are combined with different destabilization domains, leading to up to 70% increase in transgene expression. The increase in expression varies highly depending on the engineered construct and the lines cells used. Increase in expression drives exosome loading of cargo proteins in some aspects. By increasing expression and by editing trafficking signals of cargo proteins, proteins that normally locate to the ER can be trafficked to exosomes. This disclosure discloses efficient exosome delivery of a wide variety of engineered proteins, including modified antigen proteins of SARS-CoV-2 and influenza, and other proteins such as a modified alpha galactosidase A, an extracellular domain of vascular endothelial growth factor fused to a constant region of a human immunoglobulin heavy chain, and modified trastuzumab heavy and light chains. La présente invention porte sur l'insertion d'un marqueur ciblant le protéasome dans des transgènes exprimés dans des cellules eucaryotes, ce qui permet de multiplier par six les niveaux d'expression des gènes de résistance aux antibiotiques. Diverses protéines marqueurs pouvant être sélectionnées sont combinées à différents domaines de déstabilisation, ce qui permet d'augmenter l'expression du transgène jusqu'à 70 %. L'augmentation de l'expression varie fortement en fonction de la construction modifiée et des cellules de lignes utilisées. L'augmentation de l'expression entraîne le chargement d'exosomes de protéines cargo selon certains aspects. En augmentant l'expression et en modifiant les signaux de trafic des protéines cargo, les protéines qui se localisent normalement dans le réticulum endoplasmique (RE) peuvent être acheminées vers les exosomes. La présente invention concerne l'administration efficace d'exosomes d'une grande variété de protéines modifiées, comprenant des protéines antigéniques modifiées du SARS-CoV-2 et de la grippe, et d'autres protéines telles qu'une alpha-galactosidase a modifiée, un domaine extracellulaire du facteur de croissance endothéliale vasculaire fusionné à une région constante d'une chaîne lourde d'immunoglobuline humaine, et des chaînes lourdes et légères de trastuzumab modifié.