DETECTION OF GENETIC POLYMORPHISM USING OLIGONUCLEOTIDE PROBE COMPRISING UNIVERSAL BASE

The purpose of the present invention is to provide a nucleic acid detection method by which a microorganism having genetic polymorphism can be easily detected at a high sensitivity. In the present invention, an oligonucleotide probe having the following characteristics (A), (B) and (C) is prepared a...

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Hauptverfasser: KAWASHIMA Yosuke, SUGIYAMA Akio, KUROITA Toshihiro
Format: Patent
Sprache:eng ; fre ; jpn
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Beschreibung
Zusammenfassung:The purpose of the present invention is to provide a nucleic acid detection method by which a microorganism having genetic polymorphism can be easily detected at a high sensitivity. In the present invention, an oligonucleotide probe having the following characteristics (A), (B) and (C) is prepared as one type of oligonucleotide probe for detecting a nucleic acid of a target microorganism having genetic polymorphism: (A) the oligonucleotide probe has a base sequence hybridizable with a target nucleic acid, and is 17-33 bases long; (B) at least one terminal base is labeled with a fluorescence quenching dye, the fluorescence of which is quenched by interaction with guanine; and (C) the base sequence of the oligonucleotide probe comprises at least one universal base, wherein the at least one universal base is present at a position apart from both the 5' terminal base and the 3' terminal base by 8 or more bases. La présente invention a pour but de procurer un procédé de détection d'acide nucléique permettant de détecter facilement et avec une sensibilité élevée un micro-organisme présentant un polymorphisme génétique. Dans la présente invention, une sonde oligonucléotidique présentant les caractéristiques suivantes (A), (B) et (C) est préparée comme un type de sonde oligonucléotidique pour détecter un acide nucléique d'un micro-organisme cible présentant un polymorphisme génétique : (A) la sonde oligonucléotidique possède une séquence de bases hybridable avec un acide nucléique cible, et sa longueur est de 17 à 33 bases ; (B) au moins une base terminale est marquée avec un colorant d'extinction de fluorescence, sa fluorescence étant éteinte par interaction avec la guanine ; et (C) la séquence de bases de la sonde oligonucléotidique comprend au moins une base universelle, ladite au moins une base universelle étant présente à une position séparée à la fois de la base terminale 5' et de la base terminale 3' par 8 bases ou plus. 本発明は、遺伝子多型を有する微生物を簡便、高感度に検出できる核酸検出法を提供することを目的とする。本発明は、遺伝子多型を有する標的微生物の核酸を検出するための一種類のオリゴヌクレオチドプローブとして、以下の特徴(A)、(B)及び(C)を有するオリゴヌクレオチドプローブを調製する:(A)前記オリゴヌクレオチドプローブは、標的核酸にハイブリダイズする塩基配列を有し、且つ17~33塩基長の長さである;(B)少なくとも一方の末端塩基がグアニンとの相互作用により消光する蛍光消光色素で標識されている;(C)前記オリゴヌクレオチドプローブ中の塩基配列において1又は複数のユニバーサル塩基を含み、ここで少なくとも1つのユニバーサル塩基は5'末端塩基及び3'末端塩基の両方から8塩基以上離れた位置に存在する。