TRANSIENT EXPRESSION OF THERAPEUTIC PROTEINS

The present disclosure provide novel methods of large-scale production of recombinant proteins, e.g., therapeutic proteins such as antibodies, comprising concentrating an eukaryotic cell culture to a high density and transiently transfecting the eukaryotic cells with a polynucleotide encoding the recombinant protein using electroporation, e.g., flow electroporation. In some aspects, the culture is performed under perfusion conditions using, e.g., a tangential flow filtration method such as alternating tangential flow filtration. The proteins obtained using the disclosed methods are comparable to those produced using stable transfection. The methods disclosed herein can be used, for example, to accelerate therapeutic agent development, to reduce host cell toxicity, or for individualized therapeutics such as small scale manufacturing of treatments for rare or orphan diseases. La présente divulgation concerne de nouveaux procédés de production à grande échelle de protéines recombinantes, par exemple, des protéines thérapeutiques telles que des anticorps, comprenant la concentration d'une culture de cellules eucaryotes à une densité élevée et la transfection transitoire des cellules eucaryotes avec un polynucléotide codant pour la protéine recombinante à l'aide d'une électroporation, par exemple, une électroporation en flux. Dans certains aspects, la culture est effectuée dans des conditions de perfusion à l'aide, par exemple, d'un procédé de filtration tangentielle de type filtration tangentielle alternée. Les protéines obtenues à l'aide des procédés selon l'invention sont comparables à celles produites à l'aide d'une transfection stable. Les procédés selon l'invention peuvent être utilisés, par exemple, pour accélérer le développement d'un agent thérapeutique, pour réduire la toxicité des cellules hôtes, ou pour des agents thérapeutiques individualisés tels qu'une fabrication à petite échelle de traitements pour des maladies rares ou orphelines.