COMPOSITIONS AND METHODS FOR MULTIPLEX DETECTION OF MIRNA AND OTHER POLYNUCELOTIDES

Compositions and methods for quantitative detection of target nucleic acids, such as miRNAs are disclosed. The methods are especially advantageous for single-color multiplex detection of two or more targets simultaneously (e.g., in the same reaction). The methods can involve optional reverse transcription followed by qPCR performed with universal primers, fluorophore-labeled detection probes, and quencher oligonucleotides for quenching fluorescence of any detection probe not bound to a target molecule. The methods employ differential stability of detection probe-quencher oligonucleotide complexes, and by extension, differential fluorescence at various temperatures to distinguish between different target molecules. Des compositions et des procédés de détection quantitative d'acides nucléiques cibles, tels que des miARN, sont divulgués. Les procédés sont particulièrement avantageux pour la détection multiplex à une seule couleur d'au moins deux cibles simultanément (par exemple, dans la même réaction). Les procédés peuvent impliquer une transcription inverse facultative suivie par une PCR en temps réel effectuée avec des amorces universelles, des sondes de détection marquées par un fluorophore et des oligonucléotides extincteurs pour la désactivation de la fluorescence de toute sonde de détection non liée à une molécule cible. Les procédés utilisent une stabilité différentielle de complexes oligonucléotidiques de sonde-extincteur de détection et, par extension, une fluorescence différentielle à différentes températures pour faire la distinction entre différentes molécules cibles.