METHODS AND POLYNUCLEOTIDES

The present invention provides an in vitro method of modifying the glycosylation pattern of a glycoprotein, comprising contacting said glycoprotein or a glycan component of said glycoprotein with an immobilised and biotinylated enzyme that is involved in a glycosylation pathway. The invention also provides polynucleotides, vectors, host cells and polypeptides related to said method. The invention further provides an in vitro method of producing an immobilised and biotinylated enzyme that is involved in a glycosylation pathway, comprising the steps of: (a) co-expressing a polynucleotide encoding a solubility tag, a catalytic domain of said enzyme, a linker and an AviTag, as defined herein, with a polynucleotide encoding the enzyme BirA; (b) adding biotin; and (c) contacting the expressed polypeptide with streptavidin or avidin. La présente invention concerne un procédé in vitro de modification du motif de glycosylation d'une glycoprotéine, comprenant la mise en contact de ladite glycoprotéine ou d'un composant glycane de ladite glycoprotéine avec une enzyme immobilisée et biotinylée qui est impliquée dans une voie de glycosylation. L'invention concerne également des polynucléotides, des vecteurs, des cellules hôtes et des polypeptides associés audit procédé. L'invention concerne en outre un procédé in vitro de production d'une enzyme immobilisée et biotinylée qui est impliquée dans une voie de glycosylation, comprenant les étapes consistant à : (a) co-exprimer un polynucléotide codant pour un marqueur de solubilité, un domaine catalytique de ladite enzyme, un lieur et un AviTag, tel que défini dans la description, avec un polynucléotide codant pour l'enzyme BirA ; (b) ajouter de la biotine ; et (c) mettre en contact le polypeptide exprimé avec de la streptavidine ou de l'avidine.