METHOD FOR PRODUCING SCLEROTOME CELLS AND UTILIZATION OF SAID SCLEROTOME CELLS

The present invention provides a method for producing sclerotome cells from pluripotent stem cells in a xeno-free and feeder-free culture system. This method comprises: (1) a step for culturing pluripotent stem cells in a first differentiation culture medium that contains only a Wnt signal activation agent as an induction factor; (2) a step for switching the cells cultured in step (1) into a second differentiation culture medium that contains only a Wnt signal activation agent, TGFβ signal inhibitor, and BMP signal inhibitor as induction factors, and culturing; (3) a step for switching the cells cultured in step (2) into a third differentiation culture medium containing only a Wnt signal inhibitor, TGFβ signal inhibitor, and BMP signal inhibitor as induction factors, and culturing; and (4) a step for switching the cells cultured in step (3) into a fourth differentiation culture medium containing, as induction factors, only a hedgehog signal activation agent and at least one selection from the group consisting of BMP signal inhibitors and Wnt signal inhibitors, and culturing. La présente invention concerne un procédé de production de cellules sclérotiques à partir de cellules souches pluripotentes dans un système de culture sans substances xéno et sans cellules nourricières. Ce procédé comprend les élément suivants : (1) culture de cellules souches pluripotentes dans un premier milieu de culture de différenciation ne contenant qu'un agent d'activation du signal Wnt comme facteur d'induction; (2) passage des cellules cultivées à l'étape (1) dans un deuxième milieu de culture de différenciation ne contenant qu'un agent d'activation du signal Wnt, un inhibiteur du signal TGFβ et un inhibiteur du signal BMP comme facteurs d'induction, et culture; (3) passage des cellules cultivées à l'étape (2) dans un troisième milieu de culture de différenciation contenant uniquement un inhibiteur de signal Wnt, un inhibiteur de signal TGFβ et un inhibiteur de signal BMP en tant que facteurs d'induction, et culture; et (4) passage des cellules cultivées à l'étape (3) dans un quatrième milieu de culture de différenciation contenant, en tant que facteurs d'induction, uniquement un agent d'activation de signal hedgehog et au moins une sélection dans le groupe constitué des inhibiteurs de signal BMP et des inhibiteurs de signal Wnt, et culture. 本発明は、多能性幹細胞からゼノフリーかつフィーダーフリー培養系で椎板細胞を製造する方法であって、（１）多能性幹細胞を誘導因子としてWntシグナル活性化剤のみを含有する第一の分化培地で培養する工程、（２）工程（１）で培養した細胞を、誘導因子としてWntシグナル活性化剤、TGF