ENHANCEMENT OF PREDICTABLE AND TEMPLATE-FREE GENE EDITING BY THE ASSOCIATION OF CAS WITH DNA POLYMERASE

Provided are compositions and methods for precise genome editing. The compositions include a fusion protein comprising a T4 DNA polymerase segment and a segment of an MS2 bacteriophage coat protein. The fusion protein operates with a Cas enzyme and one or more guide RNAs to produce one or more indels. The indel is produced in a DNA repair template free manner. Methods for producing the indels are also provided. A method includes introducing into the cell a fusion protein containing a T4 DNA polymerase segment and a segment of an MS2 bacteriophage coat protein, a Cas enzyme, and a guide RNA comprising MS2 protein binding sites. The guide RNA directs the Cas enzyme, the T4 DNA polymerase and the MS2 binding protein to the selected chromosome locus to produce the indel. The indel may correct a mutation in an open reading frame encoded by the selected chromosome locus. L'invention concerne des compositions et procédés pour l'édition génomique précise. Les compositions comprennent une protéine de fusion comprenant un segment d'ADN polymérase T4 et un segment d'une protéine de revêtement de bactériophage MS2. La protéine de fusion agit avec une enzyme Cas et un ou plusieurs ARN guides pour produire une ou plusieurs indels. L'indel est produit sans matrice de réparation d'ADN. L'invention concerne également des procédés de production des indels. Un procédé comprend l'introduction, dans la cellule, d'une protéine de fusion contenant un segment d'ADN polymérase T4 et un segment d'une protéine de revêtement de bactériophage MS2, d'une enzyme Cas et d'un ARN guide comprenant des sites de liaison de protéine MS2. L'ARN guide dirige l'enzyme Cas, l'ADN polymérase T4 et la protéine de liaison MS2 vers le locus chromosomique sélectionné pour produire l'indel. L'indel peut corriger une mutation dans un cadre de lecture ouvert codé par le locus chromosomique sélectionné.